[发明专利]一种神经递质类代谢物全同位素内标质谱定量方法

摘要

本发明公开了一种神经递质类代谢物全同位素内标质谱定量方法，该方法采用神经递质代谢类物标准品与稳定同位素标记试剂的衍生产物作为定量内标参照物，以液相色谱‑串联四极杆质谱为检测手段的神经递质类代谢物的全同位素衍生内标定量法。本发明能同时对多个神经递质代谢类物进行定性定量分析，具有样本制备简单、定性定量准确、高通量和花费低等优点，具有可预期的临床应用前景，本发明提供的方法弥补了当前该类神经递质代谢物测试定性定量准确度低、成本高以及仅能同时对几个物质进行分析等低通量缺点。

主权项

一种神经递质类代谢物全同位素内标质谱定量方法，其特征在于，该方法采用神经递质类代谢物标准品与稳定同位素标记的苯甲酰氯的衍生产物作为定量内标参照物，对生物样本中神经递质类代谢物进行基于质谱技术平台的定性定量分析测试，包括以下具体步骤：(1)神经递质类代谢物标准品的非标记苯甲酰氯衍生产物和稳定性同位素标记苯甲酰氯衍生产物的制备：取神经递质类代谢物混合标准品母液两份，干燥，分别向两份干燥物中加入四硼酸钠缓冲液，然后分别加入非标记的苯甲酰氯和稳定性同位素标记的苯甲酰氯，进行酰化衍生反应，分别得到神经递质类代谢物的非标记苯甲酰氯衍生产物和稳定性同位素标记苯甲酰氯衍生产物，其中，同位素标记苯甲酰氯衍生产物的溶液作为内标母液，对该内标母液进一步稀释，获得基准内标溶液，用于标准曲线和生物样本的制备。(2)质谱定性定量方法的建立：采用流动注射法分别对神经递质类代谢物的非标记的苯甲酰氯衍生产物和稳定性同位素标记的苯甲酰氯衍生产物进行电喷雾离子化质谱检测参数优化,建立非标记苯甲酰氯衍生产物和稳定性同位素标记苯甲酰氯衍生产物的多反应监测条件；并将串联四极杆质谱与液相色谱仪联用，采用反相液相色谱柱对神经递质类代谢物的非标记苯甲酰氯衍生产物和稳定性同位素标记苯甲酰氯衍生产物进行色谱分离，确定各物质的色谱保留时间，建立神经递质类代谢物的定性、定量检测条件。(3)神经递质类代谢物定量标准曲线的制备：对步骤(1)获得的非标记苯甲酰氯衍生产物进行梯度稀释，并与步骤(1)获得的内标母液进行混合；采用步骤(2)中建立的质谱定性定量方法进行检测定量，以进样浓度为横坐标，以测得的各神经递质类代谢物的非标记苯甲酰氯衍生产物与基准内标溶液中与之对应的稳定性同位素标记苯甲酰氯衍生产物的峰面积或峰高的丰度比值为纵坐标，建立定量标准曲线。(4)生物样本的制备、检测和定量：取生物样本，采用直接或经提取、干燥后再复溶后，加入四硼酸钠缓冲液和非标记的苯甲酰氯试剂，进行衍生反应，再加入基准内标溶液，涡旋震荡，上清液用于检测，检测方法为步骤(2)建立和优化的方法；分别计算各神经递质类代谢物的非标记苯甲酰氯衍生产物及基准内标溶液中与之对应的稳定性同位素标记苯甲酰氯衍生产物的峰面积或峰高的丰度比值，代入定量标准曲线，计算得到样本中神经递质类代谢物的含量。