[发明专利]一种检测谷胱甘肽的试剂及其合成方法和应用

摘要

本发明提供了一种检测谷胱甘肽(GSH)的试剂和方法，所述试剂是香豆素衍生物:(Z)‑2‑(3‑chloro‑3‑(7‑(diethylamino)‑2‑oxo‑2H‑chromen‑3‑yl)allylidene)malononitrile，中文名字是(Z)‑2‑(3‑氯‑3‑(7‑(二乙胺基)‑2‑氧‑2氢‑色烯‑3‑基)亚烯丙基)丙二腈。检测方法是在pH为7.4的PBS缓冲溶液中通过荧光分光光度计定量地检测谷胱甘肽的含量。该检测方法，对GSH显示了高的灵敏度和选择性，检测过程简便、灵敏、快速，检测结果准确。

主权项

1.一种检测谷胱甘肽试剂的合成方法，其特征在于，步骤为：冰浴下，DMF溶液中缓慢滴加等体积量的三氯氧磷，搅拌半小时，加入溶解在DMF中的3‑(二乙胺基)苯酚，75℃回流4‑6h；反应完成后，把反应液倒入冰水中，并用Na₂CO₃水溶液调节pH至中性，棕色固体析出，抽滤，水洗，最后用乙醇重结晶得到4‑(二乙胺基)‑间羟基苯甲醛；将摩尔比为1:1.5的4‑(二乙胺基)‑间羟基苯甲醛和乙酰乙酸乙酯，加入1‑2滴哌啶做催化剂，在乙醇中充分溶解后回流10‑12h，浓缩、冷却后减压蒸馏得到黄色固体即为3‑乙酰基‑7‑(二乙胺基)‑2氢‑色烯‑2‑酮；冰浴下，DMF溶液中缓慢滴加等体积的三氯氧磷，搅拌，当溶液颜色变成橘红色，加入充分溶解在DMF中的3‑乙酰基‑7‑(二乙胺基)‑2氢‑色烯‑2‑酮，继续搅拌3‑4h，然后在75℃回流6‑8h；冷却至室温后将体系倒入适当量的冰水中，并用Na₂CO₃水溶液调节pH至中性，抽滤，有砖红色固体析出，然后以二氯甲烷洗脱剂经柱层析分离得到(Z)‑3‑氯‑(7‑(二乙胺基)‑2‑氧‑2‑氢‑色烯‑3‑基)丙烯醛；将摩尔比为1:1.5:1的(Z)‑3‑氯‑(7‑(二乙胺基)‑2‑氧‑2‑氢‑色烯‑3‑基)丙烯醛、丙二腈及催化剂1,4‑二氮杂二环[2,2,2]辛烷溶于乙醇中，回流14‑16小时；混合体系减压蒸馏，以二氯甲烷为洗脱剂柱层析分离得到紫红色目标试剂(Z)‑2‑(3‑氯‑3‑(7‑(二乙胺基)‑2‑氧‑2氢‑色烯‑3‑基)亚烯丙基)丙二腈。