[发明专利]一种血必净注射液中五类化合物的检测方法

摘要

本发明提供一种血必净注射液中五类化合物的检测方法，包括以下步骤：1）制备待测液；2）配制标准溶液；3）采用超高效液相‑质谱联用分析系统同时测定第一类化合物、第二类化合物、除腺嘌呤和腺苷外的第五类化合物中任意一种或多种成分的含量；4）采用超高效液相‑高分辨质谱联用分析系统同时测定第三类化合物中任意一种或多种成分的含量；5）采用超高效液相‑质谱联用分析系统同时测定第四类化合物、第五类化合物中腺嘌呤和腺苷成分中任意一种或多种成分的含量。本发明提供一种血必净注射液中五类化合物的检测方法，可高通量、准确、全面检测血必净注射液中化学成分，对于提高制剂加工生产中的质控水平、临床研究合理选药均具有积极意义。

主权项

1.一种血必净注射液中五类化合物的检测方法，包括以下步骤：1)将血必净注射液采用有机溶剂稀释后，制备待测液；2)分别配制标准溶液A、标准溶液B和标准溶液C，所述标准溶液A为血必净注射液中第一类化合物、第二类化合物、除腺嘌呤和腺苷外的第五类化合物中任意一种或多种成分标准品的溶液，所述标准溶液B为血必净注射液中第三类化合物中任意一种或多种成分标准品的溶液，所述标准溶液C为血必净注射液中第四类化合物、第五类化合物中腺嘌呤和腺苷成分中任意一种或多种成分标准品的溶液；3)将步骤1)中获得的待测液和步骤2)中配制的标准溶液A，采用超高效液相‑质谱联用分析系统同时测定第一类化合物、第二类化合物、除腺嘌呤和腺苷外的第五类化合物中任意一种或多种成分的含量；4)将步骤1)中获得的待测液和步骤2)中配制的标准溶液B，采用超高效液相‑高分辨质谱联用分析系统同时测定第三类化合物中任意一种或多种成分的含量；5)将步骤1)中获得的待测液和步骤2)中配制的标准溶液C，采用超高效液相‑质谱联用分析系统同时测定第四类化合物、第五类化合物中腺嘌呤和腺苷成分中任意一种或多种成分的含量；所述第一类化合物为7种红花黄酮类化合物成分，包括有山奈酚‑3‑O‑葡萄糖苷、野黄芩苷、槲皮素‑3‑O‑葡萄糖苷、山奈酚‑3‑O‑芸香糖苷、山奈酚‑3‑O‑槐糖苷、槲皮素‑3‑O‑芸香糖苷、羟基红花黄色素A；所述第二类化合物为8种赤芍单萜糖苷类化合物成分，包括有芍药内酯苷、芍药苷、氧化芍药苷、苯甲酰芍药苷、牡丹皮苷C、苯甲酰氧化芍药苷、牡丹皮苷J、没食子酰芍药苷；所述第三类化合物为9种丹参儿茶酚类化合物成分，包括有原儿茶醛、原儿茶酸、丹参素、迷迭香酸、丹酚酸D、丹酚酸C、丹酚酸A、紫草酸、丹酚酸B；所述第四类化合物为7种川芎和当归苯酞类化合物成分，包括有洋川芎内酯A、3‑羟基‑3‑丁基苯酞、洋川芎内酯G、洋川芎内酯I、洋川芎内酯H、洋川芎内酯N、开环洋川芎内酯I；所述第五类化合物为16种其它类化合物成分，包括有尿嘧啶、丁二酸、苯甲酸、腺嘌呤、对羟基苯甲酸、对香豆酸、苯丙氨酸、没食子酸、咖啡酸、阿魏酸、没食子酰乙酯、尿苷、腺苷、鸟苷、儿茶素、绿原酸；步骤3)中，所述采用超高效液相‑质谱联用分析系统同时测定第一类化合物、第二类化合物、除腺嘌呤和腺苷外的第五类化合物中任意一种或多种成分的含量，包括以下步骤：A1)采用超高效液相‑质谱联用分析系统中的超高效液相色谱，对待测液和标准溶液A中第一类化合物、第二类化合物、除腺嘌呤和腺苷外的第五类化合物中任意一种或多种成分进行分离；A2)采用超高效液相‑质谱联用分析系统中的三重四极杆质谱，确定待测液和标准溶液A中第一类化合物、第二类化合物、除腺嘌呤和腺苷外的第五类化合物中任意一种或多种成分，采用外标法同时对待测液中的第一类化合物、第二类化合物、除腺嘌呤和腺苷外的第五类化合物中任意一种或多种成分的含量进行定量检测；步骤A1)中，所述超高效液相色谱的色谱条件为：色谱柱：T3柱；柱温：30‑50℃；流速：0.2‑0.4ml/min；进样量：4‑6μl；流动相：水‑甲醇溶液，含甲酸，其中，A相为水且含20‑30mM甲酸，B相为甲醇且含20‑30mM甲酸；分析时间：13min；梯度洗脱；步骤A1)中，所述梯度洗脱程序的具体为：0‑8.0min，A相：B相体积比为98：2‑30：70；8.0‑11.0min，A相：B相体积比为30：70‑2：98；11.0‑13.0min，A相：B相体积比为2：98‑98：2；步骤4)中，所述采用超高效液相‑高分辨质谱联用分析系统同时测定第三类化合物中任意一种或多种成分的含量，包括以下步骤：B1)采用超高效液相‑高分辨质谱联用分析系统中的超高效液相色谱对待测液和标准溶液B中第三类化合物中任意一种或多种成分进行分离；B2)采用超高效液相‑高分辨质谱联用分析系统中的高分辨质谱，确定待测液和标准溶液B中第三类化合物中任意一种或多种成分，采用外标法同时对待测液中的第三类化合物中任意一种或多种成分的含量进行定量检测；步骤B1)中，所述超高效液相色谱的色谱条件为：色谱柱：T3柱；柱温：30‑50℃；流速：0.2‑0.4ml/min；进样量：4‑6μl；流动相：水‑甲醇溶液，含甲酸，其中，A相为水且含20‑30mM甲酸，B相为甲醇且含20‑30mM甲酸；分析时间：20min；梯度洗脱；步骤B1)中，所述梯度洗脱程序的具体为：0‑1.0min，A相：B相体积比为98：2‑98：2；1.0‑15.0min，A相：B相体积比为98：2‑30：70；15.0‑17.0min，A相：B相体积比为30：70‑2：98；17.0‑20.0min，A相：B相体积比为2：98‑98：2；步骤5)中，所述采用超高效液相‑质谱联用分析系统同时测定第四类化合物、第五类化合物中腺嘌呤和腺苷成分中任意一种或多种成分的含量，包括以下步骤：C1)采用超高效液相‑质谱联用分析系统中的超高效液相色谱，对待测液和标准溶液C中第四类化合物、第五类化合物中腺嘌呤和腺苷成分中任意一种或多种成分进行分离；C2)采用超高效液相‑质谱联用分析系统中的三重四极杆质谱，确定待测液和标准溶液C中第四类化合物、第五类化合物中腺嘌呤和腺苷成分中任意一种或多种成分，采用外标法同时对待测液中的第四类化合物、第五类化合物中腺嘌呤和腺苷成分中任意一种或多种成分的含量进行定量检测；步骤C1)中，所述超高效液相色谱的色谱条件为：色谱柱：T3柱；柱温：30‑50℃；流速：0.2‑0.4ml/min；进样量：4‑6μl；流动相：甲醇‑水溶液，含甲酸、醋酸锂，其中，A相为甲醇‑水溶液，体积比v/v：0.5：99.5‑1.5：98.5，含0.5‑1.5mM甲酸、20‑30μM醋酸锂，B相为甲醇‑水溶液，体积比v/v：0.5：99.5‑1.5：98.5，含0.5‑1.5mM甲酸、20‑30μM醋酸锂；分析时间：8min；梯度洗脱；步骤C1)中，所述梯度洗脱程序的具体为：0‑7.0min，A相：B相体积比为94：6‑5：95；7.0‑8.0min，A相：B相体积比为5：95‑94：6。