[发明专利]一种通过建立miRNAs表达水平预测三阴性乳腺癌复发转移时间及预后的方法

摘要

本发明涉及一种通过建立miRNAs表达水平预测三阴性乳腺癌复发转移时间及预后的方法，包括以下步骤步骤1、样本的收集；步骤2、RNA提取和定量PCR；步骤3、RNA样本poly A加尾；步骤4、反转录和定量PCR；步骤5、数据分析。本发明的方法揭示了miR‑4262、miR‑670‑3p、miR‑152‑3p、miR‑216a‑5p表达水平和3年、5年无病生存时间及总生存时间均存在显著相关，提示表达水平高的TNBC患者复发转移时间，多于术后2‑3年以内，预后较差。对这部分患者提前采取针对性治疗具有降低复发转移风险及改善预后的作用。

主权项

一种通过建立miRNAs表达水平预测三阴性乳腺癌复发转移时间及预后的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、样本的收集：采集三阴乳腺癌病人及部分乳腺纤维瘤患者瘤旁正常乳腺组织，取临床相关乳腺标本大小；形成处理组细胞和对照组细胞；步骤2、RNA提取和定量PCR；步骤3、RNA样本poly A加尾：对RNA样品进行PolyA加尾，反应体系为：Total RNA 2|_ig，10xPolyA PolymeraseBuffer 210x ATP Solution 2，配好后于37℃反应15min；步骤4、反转录和定量PCR：用Rever‑Tra‑Ace‑a‑Transcriptase进行反转录，然后用SYBRP＠remix Ex Taq＠n进行QRT‑PCR，miRNA的反转录釆用通用引物，U6snRNA作为内参基因，先检测引物的扩增效率和溶解曲线，引物的扩增效率在1.95‑2.05之间，溶解曲线为单峰，无引物二聚体，然后再进行后续的步骤；步骤5、数据分析：数据分析方法采用方差分析和Student T检验分析，P<0.05认为是有显著差异，P<0.0l认为有极显著差异。