[发明专利]高效液相色谱串联质谱检测血清中五种牛磺结合型胆汁酸的方法

摘要

本发明公开了一种利用高效液相色谱串联质谱检测血清中五种牛磺结合型胆汁酸的方法，包括如下步骤标准品的制备，高效液相色谱分离，串联质谱检测，血清中牛磺结合型胆汁酸的检测，定性并精准定量检测血清中包括牛磺熊脱氧胆酸，牛磺胆酸，牛磺鹅脱氧胆酸，牛磺脱氧胆酸，牛磺石胆酸五种牛磺结合型胆汁酸，检测时间短，效率高，检测灵敏度高，特异性好，成本低廉。

主权项

高效液相色谱串联质谱检测血清中五种牛磺结合型胆汁酸的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)标准品的制备：将牛磺结合型胆汁酸标准品用乙腈稀释到若干个不同浓度备用，每个浓度的标准品中加入等量的含有已知浓度内标的乙腈溶液，所述牛磺结合型胆汁酸乙腈溶液的浓度范围为2nmol/L～6μmol/L，所述内标为氘代胆酸、氘代熊脱氧胆酸，高速离心后取上清液，上清液利用离心浓缩冷冻系统冻干后，加入一定量的含有乙腈的水溶液后离心，取上清液于96孔板用于高效液相色谱串联质谱上样分析；(2)高效液相色谱分离：利用超高压液相色谱以及相应的流动相，在反向C18分析柱上对五种牛磺结合型胆汁酸进行分离；(3)串联质谱检测：色谱上分离后的五种牛磺结合型胆汁酸进入到质谱进行检测，利用三重四级杆质谱中的多重反应监控模式特异性地检测五种牛磺结合型胆汁酸，根据信号噪音比计算得到定量检测限与鉴定检测限，根据比值以及已知标准品和内标浓度值绘制标准曲线图并得到定量校正方程；(4)血清中牛磺结合型胆汁酸的检测：取血清样本，加入含内标的乙腈溶液进行蛋白沉淀，充分沉淀后第一次离心，移取血清上清液利用离心浓缩冷冻系统冻干后，加入一定量的含有乙腈的水溶液后离心，取上清液于96孔板上备用，用于高效液相色谱串联质谱上样分析；高效液相色谱串联质谱上样分析步骤同步骤(2)、步骤(3)，液相色谱质谱检测得到牛磺结合型胆汁酸与内标的比值，将比值代入到定量校正方程，计算得到血清中牛磺结合型胆汁酸的含量。