[发明专利]一种线粒体DNAG7444A突变及线粒体DNAA7445G突变的联合检测方案

摘要

一种线粒体DNAG7444A突变及线粒体DNAA7445G突变的联合检测方案，其利用口颊细胞作为DNA的来源，通过三种限制性核酸内切酶XBa I、Bfa I和Dde I进行特异性识别切割，然后又进行电泳以识别其突变位点，根据电泳获得的条带结果判断样本线粒体DNA G7444A突变或线粒体DNA A7445G突变以及线粒体DNA G7444A和线粒体DNA A7445G同时突变的结果，该方法经济节约，操作简单且快速有效，为耳聋的预防、分子诊断和基因治疗提供必要的技术支持，同时也为其他耳聋突变位点的针对性诊断提供了新方法新思路，具有重要科学意义和社会价值。

主权项

一种线粒体DNAG7444A突变及线粒体DNAA7445G突变的联合检测方案，其特征在于，所述的检测方案包括以下步骤：(1)提取样本全基因组DNA；(2)特异性PCR扩增：根据人类线粒体基因剑桥参考序列特异性设计一对引物，通过正链引物5’‑GTAGAAGAACCCTCCATAAAC‑3’和负链引物5’‑TAGGAAGCAGATAAGGAAAAT‑3’来扩增7356位点和7696位点之间的核酸序列，最终得PCR产物；(3)限制性片段长度多态性聚合酶链反应：将获得的PCR产物分别通过限制性核酸内切酶XBa I、Bfa I和Dde I进行特异性识别切割，根据PCR产物分别经过限制性核酸内切酶XBa I识别TCTAGA回文结构，限制性核酸内切酶Bfa I识别CTAG回文结构，限制性核酸内切酶Dde I识别CTNAG回文结构进行内切，然后电泳以识别其突变位点，最终根据电泳获得的条带结果判断样本线粒体DNA G7444A突变和线粒体DNA A7445G突变的结果。