[发明专利]DNA连接酶介导的DNA扩增技术

摘要

本公开提供了一种DNA连接酶介导的DNA扩增技术,具体公开了在DNA水平上扩增目标区域的方法，包括重复循环下列步骤的扩增：变性DNA模板以获得单条目标DNA链；将包括一个上游引物和一个下游引物的引物对杂交至所述目标DNA链上，其中上游引物杂交至目标区域的第一核酸序列，下游引物杂交至目标区域的第二核酸序列，并且第一核酸序列在所述目标DNA链上位于第二核酸序列的下游，下游引物包含磷酸化的5’端；将上游引物或其延伸产物与下游引物或其延伸产物连接得到半扩增产物。本申请还公开了一种用于在包括在DNA上扩增目标区域的试剂盒。

主权项

一种在DNA水平上扩增目标区域的方法，所述方法包括：重复N个循环的第一轮扩增，其中N为整数且1≤N≤40，所述第一轮扩增包括步骤：i)变性DNA模板以获得单条目标DNA链；ii)将用于扩增所述目标区域的第一轮扩增引物对杂交至所述目标DNA链，每对所述第一轮扩增引物对包括一个上游引物和一个下游引物，所述上游引物杂交至所述目标区域的第一核酸序列，所述下游引物杂交至所述目标区域的第二核酸序列，其中所述第一核酸序列和所述第二核酸序列在同一条所述目标DNA链上，且所述第一核酸序列和所述第二核酸序列之间间隔m个核苷酸，其中m为≥0的整数，其中所述第一核酸序列在所述目标DNA链上位于第二核酸序列的下游，并且所述下游引物包含磷酸化的5’末端；iii)可选地，在所述上游引物和/或一个下游引物3’末端以所述反义链作为模板进行延伸；iv)通过将所述上游引物或其延伸产物与所述下游引物或其延伸产物连接得到半扩增产物。