[发明专利]一种中性蛋白酶的清液发酵生产方法

摘要

本发明提供了一种中性蛋白酶的清液发酵生产方法，包括如下步骤：1)菌种活化；2)种子培养；3)清液发酵；4)中性蛋白酶的提取与精制。该中性蛋白酶的清液发酵生产方法通过对培养基的优化，全部采用可溶性培养基，解决了现有培养基中固形物多、粘度大，后期处理困难，成本高的问题；同时，通过工艺优化达到高酶活产品。

主权项

一种中性蛋白酶的清液发酵生产方法，其特征在于：包括如下步骤：1)菌种活化：取甘油管冷藏菌株，用接种针挑取菌种接种到装有无菌水的试管中，震荡10～20min，然后用无菌吸管取0.2～1ml菌液加到斜面培养基上，置于36～37℃恒温培养箱中培养17～24h；2)种子培养：将步骤1)中的菌液转接到灭过菌的种子培养基上培养到对数期得到种子液；3)清液发酵：将步骤2)得到的种子液接种到发酵罐进行液体发酵实验，接种量1.0％，发酵过程补料控制pH在6.0～6.5，培养温度30～32℃，转速200～600rpm/min，罐压0.04～0.05MPa，风量0.2～1.5vvm，培养周期68～80h；发酵培养基配方为：淀粉水解液5～10％，牛肉蛋白胨3～6％，麦芽糊精1～3％，碳酸氢钠0.1～1％，磷酸氢二钠0.2～0.8％，玉米浆1～2％，消泡剂0.02～0.05％；补料配方为：淀粉水解液10～20％，牛肉蛋白胨4～8％，麦芽糊精10～20％，硫酸铵0.2～0.5％，玉米浆0.8～1.5％；4)中性蛋白酶的提取与精制：将步骤3)得到的发酵液进行压滤，滤液经超滤浓缩得到浓缩液，将浓缩液进行酒精溶析得到固体酶制剂，或将浓缩液加入稳定剂得到液体酶制剂。