[发明专利]一种甘薯茎尖离体培养及组培苗病毒检测的方法

摘要

本发明是一种甘薯茎尖离体培养及组培苗病毒检测的方法，具体步骤为(1)材料采集与消毒于6月份剪取田间生长旺盛的甘薯苗顶芽，切去叶片，自来水冲洗，用无菌滤纸吸干水分，置于超净工作台上消毒备用；(2)茎尖剥离与培养在双目解剖镜下，将消毒后的甘薯顶芽用注射器针尖剥去外层叶片，将茎尖接种在初代培养基上进行培养，得到组培苗；(3)组培苗病毒检测采用指示植物针刺汁液沾接法进行病毒检测，根据检测结果淘汰带毒苗，保留脱毒苗。本发明提供了一种甘薯茎尖离体培养及组培苗病毒检测的方法，甘薯脱毒成功率提高，病毒检测准确度高，对防治甘薯病毒病提供了一种有效的检测手段。

主权项

一种甘薯茎尖离体培养及组培苗病毒检测的方法，其特征在于，具体步骤为：(1)材料采集与消毒于6月份剪取田间生长旺盛的甘薯苗顶芽，切去叶片，自来水冲洗40‑50min，用无菌滤纸吸干水分，置于超净工作台上用75％酒精浸洗25s，再用0.1％升汞消毒5min，最后用无菌水冲洗7‑8次，备用；(2)茎尖剥离与培养在双目解剖镜下，将消毒后的甘薯顶芽用注射器针尖剥去外层叶片，仅留1‑2个叶原基，将5‑6个大小为0.1‑0.2mm的茎尖接种在初代培养基上进行培养，培养基中蔗糖为30g/L，琼脂为6.0g/L，pH为5.8，培养温度为25℃，光照强度2000‑3000lx，光照时间12h/d，培养40天，得到组培苗；(3)组培苗病毒检测采用指示植物针刺汁液沾接法进行病毒检测：在巴西牵牛初生健康叶上，用灭菌注射器刺孔，然后将待测的甘薯叶片、叶柄及幼茎包扎在一起挤出汁液，沾接在针刺孔上，并以灭菌水及已知带毒薯液同样接种作为阴性对照和阳性对照，置于30℃防虫网室内遮荫保湿培养；接种后20天连续观察记载症状，根据指示植物症状，在所有沾接的指示植物中只要有一株表现典型症状，该样品即为阳性；根据检测结果淘汰带毒苗，保留脱毒苗。