[发明专利]一种定量检测血清中神经胶质纤维酸性蛋白的方法

摘要

本发明公开了一种定量检测血清中神经胶质纤维酸性蛋白的方法，首先通过蛋白A/G琼脂糖纯化树脂连接抗体Ab1，用以捕捉血清中的GFAP形成PA/G‑Ab1‑GFAP，离心清洗达到分离富集的目的；其次以柠檬酸为碳源、二乙烯三胺为钝化剂合成碳点CDs，与抗体Ab2通过酰胺键连接，形成荧光标记探针CDs‑Ab2；然后将PA/G‑Ab1‑GFAP与CDs‑Ab2相结合形成夹心结构PA/G‑Ab1‑GFAP‑Ab2‑CDs，检测荧光强度，根据标准曲线，得到血清中GFAP的含量。本发明的方法具有灵敏度高、检测简便的优点和免疫反应的高选择性、高亲和力的特点，可以直接应用于血清中GFAP的测定。

主权项

一种定量检测血清中神经胶质纤维酸性蛋白的方法，步骤如下：(1)、制备蛋白A/G琼脂糖纯化树脂连接抗体Ab1的复合物PA/G‑Ab1；(2)、制备碳点标记荧光探针CDs‑Ab2：以柠檬酸为碳源，二乙烯三胺修饰合成碳点，将CDs在EDC、NHS的作用下，与多克隆抗体Ab2通过酰胺键共价结合，形成CDs‑Ab2；(3)、将步骤(1)所得PA/G‑Ab1与血清内的GFAP特异性反应，将其从复杂基质中分离富集，形成PA/G‑Ab1‑GFAP；(4)、将PA/G‑Ab1‑GFAP与CDs‑Ab2相结合形成夹心结构PA/G‑Ab1‑GFAP‑Ab2‑CDs，用PBS溶液清洗至上清液无荧光后测试荧光强度，根据标准曲线，得到血清中GFAP的含量。