[发明专利]细菌AB5肠毒素蛋白的定性、定量检测方法

摘要

本发明涉及细菌AB₅肠毒素蛋白的定性、定量检测方法，采用超滤法先提取待测样品中的蛋白，得到样品蛋白；将样品蛋白进行酶切；然后采用膜电喷雾电离质谱法进行AB₅肠毒素特异性肽段的检测，在肽段水平上定性、定量判定AB₅肠毒素编码基因的存在；其中所述AB₅肠毒素分别为Ctx、LT、Stx1和Stx2，其序列分别为SEQ ID NO.2所示、SEQ ID NO.3所示、SEQ ID NO.5所示、SEQ ID NO.7所示。本发明采用膜电喷雾电离质谱有效去除酶切引入小分子导致的基质效应，节省了常规质谱分析流程中的脱盐步骤，使得本发明可实现极高灵敏度下的快速检测。

主权项

1.细菌AB₅肠毒素的定性、定量检测方法，其特征在于：其包括如下步骤：1）先提取待测样品中的蛋白，得到样品蛋白；2）将样品蛋白进行酶切；3）然后采用膜电喷雾电离质谱法进行AB₅肠毒素特异性肽段的检测，在肽段水平上定性、定量判定AB₅肠毒素编码基因的存在；所述AB₅肠毒素分别为AB₅肠毒素Ctx、AB₅肠毒素LT、AB₅肠毒素Stx1和AB₅肠毒素Stx2，其中所述AB₅肠毒素Ctx的特异性肽段为2个特异性肽段，其序列分别为FLDEYQSK、HDDGYVSTSISLR；AB₅肠毒素LT的特异性肽段为2个特异性肽段，其序列分别为TPNSIAAISMEN、ILSYTESMAGK；AB₅肠毒素Stx1的特异性肽段为2个特异性肽段，其序列分别为MASDEFPSMCPADGR、YNDDDTFTVK；AB₅肠毒素Stx2的特异性肽段为2个特异性肽段，其序列分别为AVNEESQPECQITGDRPVIK、YNEDDTFTVK。