[发明专利]人工创制玉米雄性不育系与高效的转育方法

摘要

本发明公开了人工创制玉米雄性不育系与高效的转育方法。本发明选择利用基因编辑技术对玉米育性基因Ms26进行定点修饰，删除5号外显子，从而改变Ms26基因表达的蛋白功能，创制出雄性不育植株，为玉米杂种优势的利用提供了基础。本发明还采用含有基因编辑转化体的植株作为突变的供体与受体材料进行杂交，通过活体内定向突变可直接突变受体材料中的野生型基因，在BC2代进行自交获得受体背景的玉米雄性不育材料。不仅避免了回交导入的连锁累赘，而且还大大提高了回交转育效率，缩短了育种周期。

主权项

1.一种培育玉米雄性不育系的方法，包括如下步骤：利用CRISPR/Cas9系统对受体玉米基因组中的育性基因进行编辑，进而使所述育性基因功能丧失，得到玉米雄性不育系；所述育性基因为编码MS26蛋白的基因；所述CRISPR/Cas9系统中包括两个sgRNA，分别命名为sgRNA1和sgRNA2；所述sgRNA1识别的靶序列为序列4所示的DNA分子；所述sgRNA2识别的靶序列为序列5所示的DNA分子；所述编辑的方法为将向所述受体玉米中导入玉米基因组编辑的载体；所述玉米基因组编辑的载体含有所述sgRNA1的编码基因、所述sgRNA2的编码基因、RNA聚合酶Ⅲ识别的启动子、Cas9蛋白表达盒和筛选标记基因；所述sgRNA1的编码基因是序列7第7245‑7347位所示的DNA分子；所述sgRNA2的编码基因是序列7第6692‑6794位所示的DNA分子；用于启动所述sgRNA1的编码基因转录的RNA聚合酶Ⅲ识别的启动子为启动子ZmU6‑2；用于启动所述sgRNA2的编码基因转录的RNA聚合酶Ⅲ识别的启动子为启动子ZmU6‑6；所述启动子ZmU6‑2是下述b1)所示的DNA分子：b1)序列2所示的DNA分子；所述启动子ZmU6‑6是下述c1)所示的DNA分子：c1)序列3所示的DNA分子。