[发明专利]一种米根霉固态发酵谷物生产麦角甾醇及其检测的方法

摘要

本发明提供了一种米根霉固态发酵谷物生产麦角甾醇及其检测的方法，属于食品分析检测领域。本发明步骤为谷物仁浸泡、煮沸、沥干、分装，接种0.5‑2％米根霉发酵剂，放入28‑32℃、湿度75‑95％培养箱中，发酵后取样，加入甲醇、乙醇和氢氧化钾，沸水浴加热，正戊烷萃取，旋转蒸发后溶于甲醇，配制麦角甾醇标准溶液，HPLC进样量20μL，检测波长282nm，流动相甲醇，流速1‑2mL/min，将样品峰面积代入麦角甾醇标品浓度‑峰面积曲线，计算麦角甾醇含量达1.8‑2.5mg/g，回收率95％以上。本发明特点是采用固态发酵技术，低成本、污染少的合成了麦角甾醇，有机溶剂萃取和HPLC检测高效提取、检测了其含量。

主权项

一种米根霉固态发酵谷物生产麦角甾醇及其检测的方法，其特征在于，以燕麦、大麦、青稞等谷物为原料，浸泡、煮沸后接种0.5‑2％的米根霉发酵剂，28‑32℃、湿度为75‑95％条件下，固态发酵72‑120h，有机试剂溶解、正戊烷萃取发酵底物中富集的麦角甾醇，采用HPLC法测定其含量，其方法为：A、原料的预处理：称取颗粒饱满的谷物仁，加入2‑5倍水(以谷物质量倍数计)和0.5‑2％乳酸(以水的体积倍数计)，20‑25℃室温下浸泡6‑12h；B、煮沸、分装：将浸泡后的谷物排出水分，转移至2‑5倍沸水中(以吸水后谷物质量倍数计)，煮沸8‑13min，沥干谷物，分装在160℃热处理2h之后的无菌不锈钢盆中；C、接种、发酵：以0.5‑2％(以煮制后谷物质量百分比计)的比例在谷物中接种米根霉发酵剂，使米根霉的孢子浓度为104‑106个/g(以煮制后谷物质量浓度计)，混匀，保鲜膜密封，在每cm2(以保鲜膜实际使用面积计)上戳0.1‑0.3个孔，放入温度为28‑32℃、湿度为75‑95％的恒温恒湿培养箱中，发酵72‑120h；D、发酵产物处理：将发酵产物混匀，垂直取样10‑20g，捣碎移入三角瓶中，依次加入30‑60mL甲醇、20‑40mL 95％乙醇和5‑10g氢氧化钾，沸水浴加热15‑25min，再加入15‑30mL蒸馏水轻轻摇匀；E、麦角甾醇提取：取5‑10mL以上混合液，加入等体积(以吸取的混合液体积计)的正戊烷，振荡萃取2‑5min，静置后收集上清液，重复两次，将收集的含有麦角甾醇的上清液在30℃、100rpm/min条件下旋转蒸发2‑5min，浓缩产物用0.2‑2mL甲醇复溶，过0.45μm有机系滤膜后待测；F、麦角甾醇测定：配制浓度为0、5、10、20、50、100、200μg/mL的麦角甾醇‑甲醇标准溶液(以甲醇体积浓度计)，HPLC检测，条件为：C18色谱柱，可变波长检测器(VWD)，进样量20μL，检测波长为282nm，流动相为甲醇，流速为1‑2mL/min，麦角甾醇的出峰时间在5‑8min，其浓度与峰面积呈线性相关，通过绘制麦角甾醇标准品浓度与峰面积的线性方程，将样品峰面积代入计算，可得出米根霉固态发酵产物中的麦角甾醇浓度。