[发明专利]一种检测动物源性食品中头孢类抗生素的间接竞争ELISA试剂盒及其应用

摘要

本发明公开了一种检测动物源性食品中头孢类抗生素的间接竞争ELISA试剂盒及其应用，包括包被有包被原的酶标板、头孢类抗生素标准品、头孢类抗生素通用抗体、酶标记二抗、稀释缓冲液、洗涤缓冲液、底物显色液和反应终止液；头孢类抗生素通用抗体能特异性识别头孢氨苄、头孢拉定、头孢羟氨苄、头孢哌酮、头孢唑啉或头孢噻肟，不能识别青霉素钠。本发明制备出一种头孢类抗生素通用抗体，该通用抗体和大部分头孢类抗生素均有较高的交叉反应率，而对于同含有β‑内酰胺环的结构类似物青霉素钠却几乎没有交叉反应，表明该通用抗体具有较高的特异性。采用该通用抗体制备的试剂盒具有敏感度高、检测药物种类多、成本低、操作简单、检测时间短的优点。

主权项

1.一种检测动物源性食品中头孢类抗生素的间接竞争ELISA试剂盒，其特征在于，包括包被有包被原的酶标板、头孢类抗生素标准品、头孢类抗生素通用抗体、酶标记二抗、稀释缓冲液、洗涤缓冲液、底物显色液和反应终止液；其中，所述头孢类抗生素通用抗体能特异性识别头孢氨苄、头孢拉定、头孢羟氨苄、头孢哌酮、头孢唑啉或头孢噻肟，不能识别青霉素钠；其中，所述头孢类抗生素的人工抗原制备方法如下：采用头孢氨苄，利用活泼酯法合成头孢氨苄—牛血清白蛋白偶联物(CEX‑BSA)；(1)称取头孢氨苄、N‑羟基琥珀酰亚胺和N,N'‑二环己基碳二亚胺，溶解于二甲基甲酰胺中，混匀得反应混合液，并将所述反应混合液于室温下孵育3h；(2)将提前准备好的冰块或冰水混合物置于水平振动仪上，将牛血清白蛋白溶液置于所述冰块或所述冰水混合物中；将所述反应混合液滴加到所述牛血清白蛋白溶液中，保持低温反应2h以上，并在4℃冰箱中反应过夜，获得所述头孢氨苄—牛血清白蛋白偶联物；其中，所述头孢类抗生素通用抗体的制备方法如下：所述头孢类抗生素通用抗体是以所述头孢氨苄—牛血清白蛋白偶联物为免疫原免疫动物后经全血分离血清获得；所述免疫剂量为每只所述免疫动物注射50μg所述免疫原；(1)首次免疫，用无菌磷酸盐缓冲液溶解所述头孢氨苄—牛血清白蛋白偶联物，与等量弗氏完全佐剂混合，充分乳化；(2)加强免疫，首次免疫后4周进行，用无菌磷酸盐缓冲液溶解所述头孢氨苄‑牛血清白蛋白偶联物，与等量弗氏不完全佐剂混合，充分乳化；经过6次所述加强免疫，每次间隔2周；(3)最后一次免疫后取全血分离获得血清，采用凝胶柱纯化所述血清，获得所述头孢类抗生素通用抗体。