[发明专利]一种樟脑中微生物限度检查方法

摘要

本发明公开了一种樟脑中微生物限度检查方法，旨在提供一种操作简单，检查结果准确可靠的胶囊中微生物限度检查方法，其技术要点依次包括下述步骤1)菌液制备；2)供试液制备；3)方法建立及回收率试验；4)控制菌检验方法的建立及验证，属于化学检测技术领域。

主权项

一种樟脑中微生物限度检查方法，其特征在于，依次包括下述步骤：1)菌液制备取经33℃培养24h的金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌胰酪大豆胨液体培养液及25℃培养24h的白色念珠菌沙氏葡萄糖液体培养液，用0.9％无菌氯化钠溶液制成含菌数为1000～10000cfu/ml的菌悬液，备用；取经25℃培养7天的黑曲霉沙氏葡萄糖琼脂斜面，加入5ml含0.05％聚山梨酯80的0.9％无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，用带有棉花的球形吸管吸出孢子悬液，用含0.05％聚山梨酯80的0.9％无菌氯化钠溶液制成含孢子数为1000～10000cfu/ml的孢子悬液，备用；2)供试液制备取本品10g，加入10ml十四烷酸异丙酯，再加入预热至45℃的胰酪大豆胨液体培养基至100ml，45℃气浴振摇5min，混匀，作为1:10供试液；3)方法建立及回收率试验试验组：吸取1:10供试液9.9ml，共5份，每份中加入0.1ml的试验菌悬液，摇匀，分别从试验菌试管中吸取1ml至平皿中，倾注胰酪大豆胨琼脂培养基；另从真菌试验菌试管中吸取1ml至平皿中，倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基；每株试验菌平行制备2个平皿；菌液对照组：吸取胰酪大豆胨液体培养基9.9ml，共5份，每份中加入0.1ml的试验菌悬液，摇匀，分别从试验菌试管中吸取1ml至平皿中，倾注胰酪大豆胨琼脂培养基；另从真菌试管中分别吸取1ml至平皿中，倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基；每株试验菌平行制备2个平皿；中和剂对照组：吸取10ml十四烷酸异丙酯，加入胰酪大豆胨液体培养基中至100ml，吸取胰酪大豆胨液体培养基9.9ml，共5份，每份中加入0.1ml的试验菌悬液，摇匀，分别从试验菌试管中吸取1ml至平皿中，倾注胰酪大豆胨琼脂培养基；另从真菌试管中分别吸取1ml至平皿中，倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基；每株试验菌平行制备2个平皿；供试品组：吸取1:10供试液1ml至平皿，平行制备4个平皿，其中2个倾注胰酪大豆胨琼脂培养基，另外2个倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基；稀释剂组：吸取胰酪大豆胨液体培养基1ml至平皿，平行制备4个平皿，其中2个倾注胰酪大豆胨琼脂培养基，另外2个倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基；中和剂组：吸取10ml十四烷酸异丙酯，加入胰酪大豆胨液体培养基中至100ml，吸取胰酪大豆胨液体培养基1ml至平皿，平行制备4个平皿，其中2个倾注胰酪大豆胨琼脂培养基，另外2个倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基；各平皿倾注琼脂培养基，待凝固后，分别置规定温度培养3－5d，测定需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数，计算其回收率；4)控制菌检验方法的建立及验证4.1)菌悬液制备取含菌量为1000～10000cfu/ml的铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌菌悬液，用0.9％无菌氯化钠溶液稀释制成含菌数为10～100cfu/ml的菌悬液，备用；4.2)制备供试液4.3)试验方法取供试品组样品做金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌检查；取供试品组样品，并加入相应的阳性菌菌液1ml进行培养，作金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌检查；取稀释液10ml做金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌检查，作为阴性对照。