[发明专利]一种酪氨酸磷酸化蛋白质定量分析方法在审
| 申请号： | 201710231387.5 | 申请日： | 2017-04-11 |
| 公开（公告）号： | CN108693348A | 公开（公告）日： | 2018-10-23 |
| 发明（设计）人： | 叶明亮;李亚楠 | 申请（专利权）人： | 中国科学院大连化学物理研究所 |
| 主分类号： | G01N33/535 | 分类号： | G01N33/535;G01N33/543 |
| 代理公司： | 沈阳科苑专利商标代理有限公司 21002 | 代理人： | 马驰 |
| 地址： | 116023 *** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种酪氨酸磷酸化蛋白质定量分析方法，该方法是以经过修饰的SH2超亲体为一抗，基于ELISA法，得到待测样品中酪氨酸磷酸化水平的动态变化曲线，检测过程中，以酪氨酸磷酸化标准蛋白为参照样品得到标准曲线，以标准曲线为参照，实现待测样品中酪氨酸磷酸化水平定量分析；该方法成本低、无需样品预富集、特异性好、检测限低。此外，ELISA法在孔板中进行，仪器简单。所采用的SH2超亲体可通过细菌表达、纯化得到大量结构稳定的蛋白，大大节约了实验成本，背景清楚，方便改造。其对酪氨酸磷酸化蛋白具有和抗体一样的高亲和高特异性且相对广谱的特点，成功实现对多个复杂样品的酪氨酸磷酸化水平定量分析。 | ||
| 搜索关键词： | 酪氨酸 定量分析 磷酸化水平 磷酸化蛋白质 标准曲线 待测样品 动态变化曲线 磷酸化蛋白 标准蛋白 复杂样品 结构稳定 实验成本 细菌表达 磷酸化 预富集 检测 广谱 抗体 孔板 修饰 一抗 蛋白 节约 改造 成功 | ||
【主权项】：
1.一种酪氨酸磷酸化蛋白质定量分析方法，其特征在于：以经过修饰的SH2超亲体为一抗，基于酶联免疫吸附法(ELISA法)作为定量分析方法，得到待测样品中酪氨酸磷酸化水平的动态变化曲线，检测过程中，以酪氨酸磷酸化标准蛋白为参照样品得到标准曲线，以标准曲线为参照，实现待测样品中酪氨酸磷酸化水平定量分析；具体为：以已知质量浓度的进行梯度稀释的酪氨酸磷酸化标准蛋白作为参照样品与梯度稀释的待测样品按照酶联免疫吸附法进行定量分析，对参照样品中不同质量浓度所含酪氨酸磷酸化蛋白质量与信号强度值建立标准曲线，所述参照样品的标准曲线的横坐标为参照样品的蛋白质量，纵坐标为信号强度值；并将一同操作条件的待测样品的动态变化曲线插入该标准曲线，所述待测样品的动态变化曲线的纵坐标为信号强度值，根据信号强度值与参照样品的标准曲线的纵坐标进行比对，得到待测样品中相同信号强度值对应酪氨酸磷酸化蛋白质的质量。
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