[发明专利]基于靶标蛋白诱导DNA酶循环生成的均相免疫分析方法

摘要

一种基于靶标蛋白诱导DNA酶循环生成的均相免疫分析方法，该方法的检测溶液包括抗体1‑DNA1偶联物、抗体2‑DNA2偶联物、血红素hemin、核酸外切酶III和DNA3/DNA4双链DNA。当靶标蛋白存在时，可被抗体1‑DNA1和抗体2‑DNA2同时免疫识别，基于邻位效应，DNA1与DNA2会进行杂交而后与双链DNA上的DNA3发生链取代反应，进而释放出富含G序列的DNA4与hemin结合形成G‑四链体/hemin DNA酶，此外，与DNA1和DNA2反应的DNA3能被核酸外切酶III识别并切断，使得DNA1和DNA2可与另一个DNA3发生链取代反应，从而释放另一个DNA4生成DNA酶，如此循环，生成大量的DNA酶。该DNA酶可催化TMB显色和鲁米诺发光，通过比色或化学发光成像的方法可对靶标蛋白进行灵敏的定量分析。该方法操作简单、快速、灵敏、普适性高，具有一定的临床应用价值。

主权项

本发明涉及一种基于靶标蛋白诱导DNA酶循环生成的均相免疫分析方法。其特征在于该免疫分析方法以抗体1‑DNA1偶联物、抗体2‑DNA2偶联物、血红素hemin、核酸外切酶III和DNA3/DNA4双链DNA的混合液为检测溶液，当靶标蛋白存在时，首先被抗体1‑DNA1偶联物和抗体2‑DNA2偶联物同时免疫识别，基于邻位效应，DNA1与DNA2进行杂交形成复合物，而后与双链DNA上的DNA3发生链取代反应，进而释放出富含G序列的DNA4与hemin结合形成G‑四链体/hemin DNA酶，然后核酸外切酶III识别并切断杂交在DNA1和DNA2上的DNA3，使得DNA1和DNA2可与另一个双链DNA上的DNA3发生链取代反应，从而释放另一个DNA4生成DNA酶，如此循环，生成大量的DNA酶，最后，在检测溶液中加入显色剂或化学发光底物，获得灵敏的比色或化学发光信号。