[发明专利]一种组织工程角膜内皮的构建方法

摘要

本发明提供了一种组织工程角膜内皮及其构建方法，包括制备猪角膜后弹力层、培养、诱导人多能干细胞、构建组织工程角膜内皮等步骤。本发明的组织工程角膜内皮的构建方法及其组织工程角膜内皮,相较于羊膜或其他载体，本发明所使用后弹力层本身即为角膜正常结构，不会过于柔软、透明性好。所使用的种子细胞为人多能干细胞诱导分化而来，不受原代细胞增殖能力低的限制。并且，本发明组织工程角膜内皮制备过程简单，来源广泛，易于操作。

主权项

一种组织工程角膜内皮的构建方法，包括以下步骤：1)制备猪角膜后弹力层：将猪角膜去除猪角膜内皮细胞，使猪后弹力层与角膜基质完整分离，将完整分离的猪角膜后弹力层干燥、灭菌备用；2)培养、诱导人多能干细胞：将常规培养的人多能干细胞培养至适宜大小，使用诱导培养基诱导，至人多能干细胞克隆内细胞体积变大、细胞形态由圆形或卵圆形变为多边形，排列紧密，克隆周边细胞呈梭形纤维状，终止诱导；将终止诱导的人多能干细胞克隆消化后使用分化培养基重悬并计数备用；3)构建组织工程角膜内皮：将步骤1)获得的猪角膜后弹力层，加入包被液进行包被，再将步骤2)获得的诱导人多能干细胞接种于步骤1)获得的猪角膜后弹力层，细胞贴附后，更换新鲜分化培养基培养后，获得组织工程角膜内皮。