[发明专利]一种用于合成阿莫西林的青霉素酰化酶的分离纯化与固定化耦合方法

摘要

本发明涉及生物工程领域，具体涉及一种用于合成阿莫西林的青霉素酰化酶的分离纯化与固定化耦合方法。该方法包括以下步骤：(1)制备含有青霉素酰化酶粗酶液和无机盐的无机盐混合溶液，所述无机盐混合溶液中无机盐的浓度为0.05‑0.3g/mL；(2)将步骤(1)所得无机盐混合溶液与叔丁醇混合，然后进行分相，得到富含叔丁醇的上相溶液、中相固体以及富含盐和青霉素酰化酶的下相溶液组成的三相分配体系；(3)向步骤(2)所得下相溶液中加入载体进行青霉素酰化酶的固定化。本发明的方法操作简便、所得青霉素酰化酶的活性和收率较高。 1

主权项

1.一种用于合成阿莫西林的青霉素酰化酶的分离纯化与固定化耦合方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

(1)制备由青霉素酰化酶粗酶液和无机盐组成的无机盐混合溶液，所述无机盐混合溶液中无机盐的浓度为0.1‑0.2g/mL；

(2)将步骤(1)所得无机盐混合溶液与叔丁醇混合，然后进行分相，得到富含叔丁醇的上相溶液、中相固体以及富含盐和青霉素酰化酶的下相溶液组成的三相分配体系；

(3)向步骤(2)所得下相溶液中加入载体进行青霉素酰化酶的固定化；

其中，所述无机盐为水溶性磷酸盐；

其中，所述无机盐混合溶液的pH为7.5‑8.5；

其中，所述无机盐混合溶液与叔丁醇的体积比为1：0.4‑0.6。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，在步骤(1)中，所述青霉素酰化酶粗酶液为经细胞破碎后未处理的用于合成阿莫西林的青霉素酰化酶粗酶液，或者为经细胞破碎后去除菌体等固体杂质后的用于合成阿莫西林的青霉素酰化酶粗酶液。

3.根据权利要求2所述的方法，其中，所述青霉素酰化酶粗酶液的酶活为5‑50IU/mL。

4.根据权利要求1所述的方法，其中，在步骤(2)中，所述分相的方式为离心分相，该分相温度为0‑40℃、离心力为500‑5000g、时间为2‑60min。

5.根据权利要求1所述的方法，其中，在步骤(2)中，所述分相的方式为静置分相，该分相温度为4‑30℃、时间为0.1‑4h。

6.根据权利要求1所述的方法，其中，所述步骤(2)的过程还包括：从所述上相溶液中回收叔丁醇并循环用于与无机盐混合溶液相混合的过程中。

7.根据权利要求1所述的方法，其中，在步骤(3)中，所述下相溶液的酶活为5‑20IU/mL，若高于20IU/mL用水稀释至上述范围。

8.根据权利要求1或7所述的方法，其中，在步骤(3)中，所述载体的加入量为总酶活与载体重量之比为30‑60IU/g。

9.根据权利要求8所述的方法，其中，所述载体为环氧基载体或活化的氨基载体。