[发明专利]一种用于检测乳腺癌21基因表达水平的多重荧光PCR检测试剂盒

摘要

本发明公开了一种用于检测乳腺癌21基因表达水平的多重荧光PCR检测试剂盒，一种用于检测乳腺癌21基因表达水平的多重荧光PCR检测试剂盒，其特征在于：依次包括检测Ki‑67、STK15、Survivin、stromelysin 3、Cathepsin L2、Cyclin B1、GRB7、HER‑2、MYBL2、ER、PR、BCL2、SCUBE2、GSTM1、BAG1、CD68、GAPDH、Beta‑actin、RPLPO、GUS和TFRC的第一至第二十一引物组以及相应的第一至第二十一检测探针。本发明的试剂盒采用多重荧光PCR扩增技术，以石蜡包埋组织切片中提取的RNA为检测样本，能够检测乳腺癌肿瘤组织中21个不同基因的表达水平，辅助临床医生评估早期乳腺癌患者的化疗收益和复发风险。

主权项

一种用于检测乳腺癌21基因表达水平的多重荧光PCR检测试剂盒，其特征在于：依次包括检测Ki‑67、STK15、Survivin、stromelysin 3、Cathepsin L2、Cyclin B1、GRB7、HER‑2、MYBL2、ER、PR、BCL2、SCUBE2、GSTM1、BAG1、CD68、GAPDH、Beta‑actin、RPLPO、GUS和TFRC的第一至第二十一引物组以及相应的第一至第二十一检测探针，且第一至第二十一检测探针的5’端修饰有荧光报告基团，3’端修饰有荧光猝灭基团；其中，第一引物组包括21‑MKI67‑F和21‑MKI67‑R，分别包括如SEQ ID NO 01和02所示的序列，第一检测探针为21‑MKI67‑P，包括如SEQ ID NO 03所示的序列；第二引物组包括21‑AURKA‑F和21‑AURKA‑R，分别包括如SEQ ID NO 04和05所示的序列，第二检测探针为21‑AURKA‑P，包括如SEQ ID NO 06所示的序列；第三引物组包括21‑BIRC5‑F和21‑BIRC5‑R，分别包括如SEQ ID NO 07和08所示的序列，第三检测探针为21‑BIRC5‑P，包括如SEQ ID NO 09所示的序列；第四引物组包括21‑MMP11‑F和21‑MMP11‑R，分别包括如SEQ ID NO 10和11所示的序列，第四检测探针为21‑MMP11‑P，包括如SEQ ID NO 12所示的序列；第五引物组包括21‑CTSV‑F和21‑CTSV‑R，分别包括如SEQ ID NO 13和14所示的序列，第五检测探针为21‑CTSV‑P，包括如SEQ ID NO 15所示的序列；第六引物组包括21‑CCNB1‑F和21‑CCNB1‑R，分别包括如SEQ ID NO 16和17所示的序列，第六检测探针为21‑CCNB1‑P，包括如SEQ ID NO 18所示的序列；第七引物组包括21‑GRB7‑F和21‑GRB7‑R，分别包括如SEQ ID NO 19和20所示的序列，第七检测探针为21‑GRB7‑P，包括如SEQ ID NO 21所示的序列；第八引物组包括21‑ERBB2‑F和21‑ERBB2‑R，分别包括如SEQ ID NO 22和23所示的序列，第八检测探针为21‑ERBB2‑P，包括如SEQ ID NO 24所示的序列；第九引物组包括21‑MYBL2‑F和21‑MYBL2‑R，分别包括如SEQ ID NO 25和26所示的序列，第九检测探针为21‑MYBL2‑P，包括如SEQ ID NO 27所示的序列；第十引物组包括21‑ESR1‑F和21‑ESR1‑R，分别包括如SEQ ID NO 28和29所示的序列，第十检测探针为21‑ESR1‑P，包括如SEQ ID NO 30所示的序列；第十一引物组包括21‑PGR‑F和21‑PGR‑R，分别包括如SEQ ID NO 31和32所示的序列，第十一检测探针为21‑PGR‑P，包括如SEQ ID NO 33所示的序列；第十二引物组包括21‑BCL2‑F和21‑BCL2‑R，分别包括如SEQ ID NO 34和35所示的序列，第十二检测探针为21‑BCL2‑P，包括如SEQ ID NO 36所示的序列；第十三引物组包括21‑SCUBE2‑F和21‑SCUBE2‑R，分别包括如SEQ ID NO 37和38所示的序列，第十三检测探针为21‑SCUBE2‑P，包括如SEQ ID NO 39所示的序列；第十四引物组包括21‑GSTM1‑F1和21‑GSTM1‑R，分别包括如SEQ ID NO 40和41所示的序列，第十四检测探针为21‑GSTM1‑P，包括如SEQ ID NO 42所示的序列；第十五引物组包括21‑BAG1‑F和21‑BAG1‑R，分别包括如SEQ ID NO 43和44所示的序列，第十五检测探针为21‑BAG1‑P，包括如SEQ ID NO 45所示的序列；第十六引物组包括21‑CD68‑F和21‑CD68‑R，分别包括如SEQ ID NO 46和47所示的序列，第十六检测探针为21‑CD68‑P，包括如SEQ ID NO 48所示的序列；第十七引物组包括21‑GAPDH‑F和21‑GAPDH‑R，分别包括如SEQ ID NO 49和50所示的序列，第十七检测探针为21‑GAPDH‑P，包括如SEQ ID NO 51所示的序列；第十八引物组包括21‑Beta‑actin‑F和21‑Beta‑actin‑R，分别包括如SEQ ID NO 52和53所示的序列，第十八检测探针为21‑Beta‑actin‑P，包括如SEQ ID NO 54所示的序列；第十九引物组包括21‑RPLP0‑F和21‑RPLP0‑R，分别包括如SEQ ID NO 55和56所示的序列，第十九检测探针为21‑RPLP0‑P，包括如SEQ ID NO 57所示的序列；第二十引物组包括21‑GUSB‑F和21‑GUSB‑R，分别包括如SEQ ID NO 58和59所示的序列，第二十检测探针为21‑GUSB‑P，包括如SEQ ID NO 60所示的序列；第二十一引物组包括21‑TFRC‑F和21‑TFRC‑R，分别包括如SEQ ID NO 61和62所示的序列，第二十一检测探针为21‑TFRC‑P，包括如SEQ ID NO 63所示的序列；该多重荧光PCR检测试剂盒的反应体系的组成如下：第一至第二十一引物组中的至少一引物组相应的检测探针1×PCR缓冲液MgCl2dNTPsTaq酶H2O模板；该多重荧光PCR检测试剂盒的每一反应体系的反应条件均为：95℃预变性5分钟，1个循环；95℃变性25秒，64℃退火20秒，72℃延伸15秒，15个循环；95℃变性25秒，60℃退火35秒，72℃延伸10秒，30个循环；后30个循环在退火时检测荧光信号。