[发明专利]一种适合HEK293细胞的双顺反子表达载体及其制备方法、表达系统、应用有效
| 申请号： | 201710240457.3 | 申请日： | 2017-04-13 |
| 公开（公告）号： | CN107058387B | 公开（公告）日： | 2019-09-06 |
| 发明（设计）人： | 王天云;林艳;井长勤;李琴;王建华;郭梦龙 | 申请（专利权）人： | 新乡医学院 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/65 |
| 代理公司： | 郑州睿信知识产权代理有限公司 41119 | 代理人： | 张鹏辉 |
| 地址： | 453003*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种适合HEK293细胞的双顺反子表达载体及其制备方法、表达系统、应用，属于基因工程技术领域。本发明的适合HEK293细胞的双顺反子表达载体，包含如下元件：第一核基质结合区序列‑启动子‑目的基因‑内部核糖体进入位点序列‑筛选标记基因‑Poly A–第二核基质结合区序列。该载体利用优化的MAR序列可以显著提高HEK293细胞转基因表达，克服转基因沉默，实现转基因在宿主细胞中的高效、长期表达。同时可实现目的基因和筛选标记的同时表达，可减少由于不同表达框存在导致的假阳性细胞克隆，提高阳性细胞克隆筛选率，并克服传统载体目的基因与筛选标记基因表达不均衡的问题。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 适合 hek293 细胞 顺反子 表达 载体 及其 制备 方法 系统 应用 | ||
【主权项】：
1.HEK293表达系统，其特征在于：所述HEK293表达系统由双顺反子表达载体构建得到；将所述双顺反子表达载体转染进入HEK293细胞中，即得；所述双顺反子表达载体包含如下元件：人X‑29 MAR序列‑CMV启动子‑目的基因‑内部核糖体进入位点序列‑筛选标记基因‑ Poly A –人β‑珠蛋白MAR序列；所述人X‑29 MAR序列为GenBank：EF694970.1，第1～3337位碱基；所述人β‑珠蛋白MAR序列为GenBank：L22754.1，第840～2998位碱基；所述筛选标记基因为NPT抗性弱化基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO .2所示。
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