[发明专利]一种能够同时繁殖大豆孢囊线虫并进行大豆孢囊线虫抗性筛选方法

摘要

一种能够同时繁殖大豆孢囊线虫并进行大豆孢囊线虫抗性筛选方法，涉及一种大豆孢囊线虫抗性筛选方法。是要解决现有方法存在统计孢囊数目难度大，费时费力，雄虫难以获得，培养占用空间大的问题。方法一、将双层滤纸置于培养袋内；二、向培养袋加入无菌水；三、将大豆幼苗的根部放入培养袋中，将培养袋竖直放入夹子内，将夹子悬挂在培养架上培养；四、取出培养袋，滴入大豆孢囊线虫二龄幼虫悬浮液培养；五、收集雄虫，将培养袋内的滤纸连同大豆的根系取出，统计孢囊数目。本方法直接观测孢囊线虫发育状态，快速收集干净的大豆孢囊线虫雄虫，统计孢囊数不需要水冲洗，孢囊清晰易于观察统计，结果平行性好。本发明用于进行大豆孢囊线虫抗性筛选。

主权项

一种能够同时繁殖大豆孢囊线虫并进行大豆孢囊线虫抗性筛选方法，其特征在于该方法包括以下步骤：一、首先将双层滤纸重叠放置于培养袋内，培养袋开口向上，滤纸上部与生长袋开口处高度一致；二、用移液器向培养袋加入无菌水9～11mL，使培养袋中的滤纸充分浸湿，且保证培养袋底部有无菌水存留；三、将大豆幼苗移到浸湿的滤纸上部，使幼苗的根部通过滤纸的空隙放入培养袋中，保持子叶高于培养袋的上边缘，然后将培养袋竖直放入夹子内，每个夹子中放置两个培养袋，然后将夹子悬挂在培养架上，再将整个培养架置于培养箱中，光照周期为：16h光照，8h黑暗，昼夜温度分别为24℃和22℃，每天向每个培养袋内浇无菌水3‑5mL，每三天向每个培养袋内浇5～6mL霍格兰氏营养液，每天保持培养袋底部有1～2mL的存水，滤纸保持湿润；四、植株继续生长5‑7天，之后从夹子中取出培养袋，向大豆的主根和侧根周围均匀滴入3mL 100条/mL的大豆孢囊线虫二龄幼虫悬浮液，然后将培养袋水平放置在培养箱中进行暗培养；24h后取出培养袋竖直放入培养架的夹子中，在培养箱中继续光照培养15～21天；其中暗培养的条件为：昼夜温度分别为24℃和22℃，湿度80％；光照培养的条件为：昼夜温度分别为24℃和22℃，湿度80％，光照周期：16h光照，8h黑暗，光照强度为18000LX；五、用无菌水在培养袋内冲洗根表面，然后将培养袋内的无菌水收集至灭菌的容器中，完成雄虫收集，在接种大豆孢囊线虫21天后，将培养袋内的滤纸连同大豆的整个根系取出，剪去地上部分，平铺在实验台上，进行孢囊数目统计，然后根据孢囊数目和感病对照品种的孢囊数目比较确定大豆孢囊线虫抗性品种，除去用于统计的孢囊数的样品，剩余的样品在接种大豆孢囊线虫40‑45天收集成熟孢囊，用于后续的研究。