[发明专利]从瓯柑果实中分离纯化多甲氧基黄酮类化合物的方法

摘要

本发明提供一种从瓯柑果实中分离纯化多甲氧基黄酮类化合物的方法。该方法以瓯柑果实的果皮为原料，采用超声波辅助提取，固相萃取柱去糖和分段，进而使用高速逆流色谱(HSCCC)纯化分离技术，最终得到高纯度的川陈皮素、橘皮素、5‑去甲川陈皮素三种多甲氧基黄酮类化合物。本发明无需高温高压及惰性气体的保护，操作简单，生产周期短，样品用量少，条件稳定容易控制，生产周期短，适用性广，纯化产物回收率高，纯度高，三种化合物的纯度均在98％以上，所用的溶剂可回收后重复利用，成本较低，纯化过程精确定性定量，准确度高；可以提高HSCCC的物质分辨率和重现度。适用于工业化生产和科学研究。

主权项

1.一种从瓯柑果实中分离纯化多甲氧基黄酮类化合物的方法，其特征在于，通过以下步骤实现：（1）样品提取：取冷冻干燥的瓯柑果皮粉末用95%乙醇超声提取，固液比为1：20，提取温度25 ℃，每次45 min，经真空抽滤后，合并上清液，在旋转蒸发仪上蒸干至无乙醇相，溶于去离子水中；（2）Sep‑pak® C18固相萃取柱去糖和分段：取步骤（1）中得到的水溶液上样Sep‑pak® C18固相萃取柱，上样后固相萃取柱先用去离子水洗脱25个柱床体积，去掉极性较高的杂质，然后用甲醇进行梯度洗脱，洗脱液在旋转蒸发仪上36 ℃蒸干得到富含多甲氧基黄酮的100%洗脱组分；（3）HSCCC进一步分离纯化川陈皮素、橘皮素和5‑去甲川陈皮素：配制正己烷‑乙酸乙酯‑甲醇‑水的溶剂体系，充分摇匀过夜，上相为固定相，下相为流动相，首先用固定相以20 mL/min流速泵入HSCCC分离柱，待充满后，开启逆流色谱仪将转速调至800 rpm，将流动相以2 mL/min的速度泵入HSCCC分离柱，待流动相从出口稳定流出时，将步骤（2）得到的100%洗脱组分50 mg溶于5 mL下相中进样，根据色谱仪检测器采集的图谱中的峰型分管收集各组分，峰Ⅰ、峰Ⅱ和峰Ⅲ的组分分别为川陈皮素、橘皮素和5‑去甲川陈皮素；用UPLC测定各组分的组成，分别合并含有单一多甲氧基黄酮类化合物的试管，在旋转蒸发仪上36 ℃蒸干共得到三种多甲氧基黄酮类化合物，分别为川陈皮素、橘皮素、5‑去甲川陈皮素，产品纯度均在98%以上；其中步骤（2）所述的梯度洗脱分别为35%甲醇溶液、100%甲醇溶液，洗脱顺序为35%甲醇12个柱体积、100%甲醇3个柱体积；步骤（3）进行HSCCC纯化时，选择正己烷‑乙酸乙酯‑甲醇‑水=1.1：0.8：1.1：0.9的溶剂体系。