[发明专利]一种多菌灵和甲基硫菌灵二合一检测酶联免疫试剂盒

摘要

本发明涉及一种多菌灵和甲基硫菌灵二合一检测酶联免疫试剂盒，试剂盒包括酶标板、酶标记物工作液、多菌灵和甲基硫菌灵特异性抗体浓缩液、洗涤工作液、复溶工作液和TMB显色液，其中，所述酶标板的微孔条上预包被多菌灵和甲基硫菌灵偶联抗原，所述酶标记物工作液为酶标记抗抗体工作液。本发明多菌灵和甲基硫菌灵二合一检测酶联免疫试剂盒，是应用ELISA技术研发的新一代药物残留检测产品，与传统仪器分析技术相比，具有检测快速、简便、准确，低成本以及检测灵敏度高等特点，能最大限度地减少操作误差和工作强度。

主权项

一种多菌灵和甲基硫菌灵二合一检测酶联免疫试剂盒，其特征在于：试剂盒包括酶标板、酶标记物工作液、多菌灵和甲基硫菌灵特异性抗体浓缩液、洗涤工作液、复溶工作液和TMB显色液，其中，所述酶标板的微孔条上预包被多菌灵和甲基硫菌灵偶联抗原，所述酶标记物工作液为酶标记抗抗体工作液，具体如下：(1)洗涤工作液，浓缩洗涤液1：19体积比稀释而成，所述浓缩洗涤液为pH值为7.1～7.5，含有0.8％～1.2％吐温‑20、0.01％～0.03％硫柳汞防腐剂、0.01～0.03mol/L的磷酸盐缓冲液，所述百分比为重量体积百分比；(2)复溶工作液，浓缩复溶液1：1体积比稀释而成，pH值为7.2～7.7，含有8％～12％卵清蛋白、0.1～0.4mol/L的磷酸盐缓冲液，所述百分比为重量体积百分比；(3)TMB显色液，包括TMB底物液A液和TMB底物液B液，A液为过氧化氢，B液为邻苯二胺或四甲基联苯胺；(4)终止液，0.5mol/L的盐酸缓冲液；(5)酶标板为96孔酶标板，其中在酶标板制备过程中所用的包被缓冲液为pH值为9.6，0.05mol/L的碳酸盐缓冲液，所用封闭液为pH值为9.1～9.5，含有3％～10％小牛血清、0.2％吐温‑20、0.1～0.3mol/L的碳酸盐缓冲液，所述百分比为重量体积百分比；酶标板的制备过程为，用包被缓冲液将包被原稀释成0.1～0.2μg/ml，每孔加入100μl，37℃温育2h或4℃过夜，倾去包被液，用洗涤液洗涤2次，每次30s，拍干，然后在每孔中加入150～200μl封闭液37℃温育1～2h，倾去孔内液体拍干，干燥后用铝膜真空；(6)其中，本发明多菌灵和甲基硫菌灵特异性抗体的制备流程为：将这两种抗原注入到小鼠进行免疫反应，最终得到两种针对不同多菌灵和甲基硫菌灵结构的抗体；(7)酶标二抗工作液，本实施例酶标二抗采用羊抗鼠抗抗体，以羊作为免疫动物，以鼠源抗体为免疫原，对无病原体羊进行免疫，得到羊抗鼠抗抗体；(8)多菌灵和甲基硫菌灵标准溶液，浓度分别为0μg/L、1μg/L、3μg/L、9μg/L、27μg/L和81μg/L；其中标准品稀释液为PH值7.4的0.02mol/L磷酸盐缓冲液。