[发明专利]一种制备N-糖基化脯氨酸氨肽酶的方法及应用有效
| 申请号： | 201710260858.5 | 申请日： | 2017-04-20 |
| 公开（公告）号： | CN106967703B | 公开（公告）日： | 2020-05-08 |
| 发明（设计）人： | 田亚平;杨宏宇;刘小峰;周楠迪 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N9/48 | 分类号： | C12N9/48;C12N15/57;C12N15/81;C12P21/06 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 张勇 |
| 地址： | 214122 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种制备N‑糖基化脯氨酸氨肽酶的方法及应用，属于酶工程技术领域。本发明中毕赤酵母表达的脯氨酸氨肽酶N‑端包含组氨酸标签，利用金属螯合层析对表达的蛋白进行一步纯化，回收率达86.5％，纯化倍数为13.4倍。纯化的氨肽酶被证实发生了N‑糖基化修饰，且糖基化修饰作用使酶的稳定性产生了大幅度的提高。本发明提供的麦谷蛋白水解的方法，使纯酶与碱性蛋白酶发生协同作用，使游离氨基酸含量由水解前的16.2mg/L提高至2770.1mg/L。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 制备 糖基化 脯氨酸 氨肽酶 方法 应用 | ||
【主权项】：
一种提高脯氨酸氨肽酶稳定性的方法，其特征在于，在脯氨酸氨肽酶N端进行糖基化，所述糖基化是在氨基酸序列的第28‑31位NYSR、第316‑319位NWSR或第328‑331位NFSI处进行糖基化；所述脯氨酸氨肽酶由SEQ ID NO.1所示基因编码。
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