[发明专利]基于高通量测序用于地中海贫血大样本筛查的建库方法在审
| 申请号： | 201710267517.0 | 申请日： | 2017-04-21 |
| 公开（公告）号： | CN108728903A | 公开（公告）日： | 2018-11-02 |
| 发明（设计）人： | 陈川;陈建国;张静;王瑢;杨传春;张文勇 | 申请（专利权）人： | 深圳市乐土精准医疗科技有限公司 |
| 主分类号： | C40B50/06 | 分类号： | C40B50/06 |
| 代理公司： | 深圳鼎合诚知识产权代理有限公司 44281 | 代理人： | 孙银行;彭家恩 |
| 地址： | 518000 广东省深圳市南山*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 一种基于高通量测序用于地中海贫血大样本筛查的建库方法，包括：使用带有标签序列的特异性引物分别扩增HBA1、HBA2和HBB基因，其中标签序列用于区分不同样本；将不同样本的相同基因的扩增产物混合，然后将混合后的不同基因的扩增产物混合；对混合产物进行纯化；对纯化产物进行不完全打断；进行5’磷酸化平末端修复和3’末端加A，获得具有5’磷酸化和3’粘性末端A的DNA片段；将DNA片段与含有区分文库的唯一条形码序列的接头相连；对连接产物进行纯化，获得适用于高通量测序的上机文库。本发明的方法能够覆盖目前已知的与地中海贫血相关的245种HBB基因突变类型和93种HBA基因突变类型，同时也能检测出目标区域范围内的新发型别。 | ||
| 搜索关键词： | 地中海贫血 高通量测序 基因突变类型 标签序列 扩增产物 大样本 磷酸化 建库 筛查 文库 样本 特异性引物 条形码序列 不同基因 纯化产物 混合产物 连接产物 目标区域 粘性末端 基因 平末端 新发型 扩增 上机 打断 修复 检测 覆盖 | ||
【主权项】：
1.一种基于高通量测序用于地中海贫血大样本筛查的建库方法，其特征在于，包括：(1)使用带有标签序列的特异性引物分别扩增HBA1、HBA2和HBB基因，其中所述标签序列用于区分不同样本；(2)将不同样本的相同基因的扩增产物混合，然后将混合后的不同基因的扩增产物混合；(3)对上一步的混合产物进行纯化；(4)对上一步的纯化产物进行不完全打断，然后对打断产物进行纯化；(5)对上一步的纯化产物进行5’磷酸化平末端修复和3’末端加A，获得具有5’磷酸化和3’粘性末端A的DNA片段；(6)将上一步的DNA片段与含有区分文库的唯一条形码序列的接头相连，获得可以区分文库信息的连接产物；和(7)对所述连接产物进行纯化，获得适用于高通量测序的上机文库。
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