[发明专利]一种防止月季组培苗褐化的方法

摘要

本发明涉及一种防止月季组培苗褐化的方法，该方法包括如下步骤：1)、取材；2)、消毒：3)、接种前预处理：将接种前的已消毒的外植体用已过滤消毒的聚乙烯吡咯烷酮水溶液(浓度为2‑3g/L)浸泡10分钟左右进行预处理；4)、接种、诱导培养：将预处理后的月季茎段摊铺在已消毒的滤纸上晾干后接种于诱导培养基中，直至不定芽长至3‑4cm，待增殖培养，5)、增殖培养：将诱导生成的不定芽切下，在增殖培养基中进行培养，15‑20天继代一次，6)、生根培养：将增殖培养的组培苗切成单株接种于生根培养基培养。本发明优化了月季组织培养各个阶段的操作方法，有效降低褐化率到10％以下，解决了月季组培褐化率高的难题。

主权项

1.一种防止月季组培苗褐化的方法，其特征在于：步骤为：选取北方地区春末季节半木质化的月季带芽茎段，去除茎尖及上部幼嫩茎段后切成2‑3 cm单芽茎段，流动自来水冲洗1h，75%酒精处理30s后用已灭菌的蒸馏水冲洗3次，5%NaClO处理15min后用已灭菌蒸馏水冲洗3次对外植体进行消毒，消毒期间不断摇晃使其消毒充分，切除已消毒茎段首尾置于已灭菌的滤纸晾干后待接种；用孔径为0.22μm过滤膜过滤2g/L聚乙烯吡咯烷酮水溶液，将待接种的月季茎段浸泡于上述已灭菌的聚乙烯吡咯烷酮中10min，摊铺在已消毒的滤纸上晾干后接种于诱导培养基中，所述诱导培养基组成为：MS+30g/L蔗糖+7.5g/L琼脂+0.5mg/L 6‑苄氨基嘌呤+0.01mg/L萘乙酸，pH5.8，诱导培养条件为22℃/白天，20℃/黑夜，12h/白天，12h/黑夜，光照强度为3300Lux；待经诱导培养的不定芽长至4‑5cm时，将诱导生成的不定芽切下，在增殖培养基中进行培养，所述增殖培养基组成为：MS+30g/L蔗糖+7.5g/L琼脂+0.5mg/L 6‑苄氨基嘌呤+0.01mg/L萘乙酸+0.01mg/L 赤霉素+0.5g/L活性炭，pH5.6，15天继代一次，增殖培养条件为22℃/白天，20℃/黑夜，12h/白天，12h/黑夜，光照强度为3300Lux；待月季组培苗培养至5‑6cm后，切成单芽置于生根培养基中，所述生根培养基组成为1/2 MS+25g/L蔗糖+7.5g/L琼脂+0.2mg/L萘乙酸+0.1mg/L 吲哚丁酸+0.5g/L活性炭，pH5.6，于20℃/白天，18℃/黑夜，16h/白天，8h/黑夜，光照强度4500Lux条件下培养。