[发明专利]MACF1基因在成骨细胞中条件性敲除的小鼠模型的构建及应用

摘要

本发明公开了一种MACF1基因在成骨细胞中条件性敲除的小鼠模型的构建及应用，用于解决现有技术实用性差的技术问题。技术方案是利用Cre‑Loxp系统，通过MACF1fl/fl小鼠与成骨细胞特异性表达Cre重组酶的Sp7‑Cre转基因小鼠交配，获得成骨细胞特异性敲除MACF1的小鼠模型(Sp7‑Cre；MACF1fl/fl)。所述模型因MACF1基因的条件性敲除造成小鼠骨形成能力降低。该模型可以用于研究MACF1基因在成骨细胞中的功能及其在骨形成过程中的作用，同时还可以作为骨质疏松症及其它骨形成相关疾病发病/发生机制研究的动物模型，并用于筛选预防、治疗或改善此类疾病的药物。

主权项

一种MACF1基因在成骨细胞中条件性敲除的小鼠模型的构建方法，其特征在于包括以下步骤：步骤一、选用MACF1fl/+小鼠自交，扩繁获得纯合子MACF1fl/fl小鼠；步骤二、将获得的MACF1fl/fl小鼠与Sp7‑Cre转基因小鼠交配，获得半敲Sp7‑Cre；MACF1fl/+小鼠；步骤三、选用Sp7‑Cre转基因小鼠与SPF级C57BL/6J小鼠交配，获得Sp7‑Cre转基因小鼠；步骤四、将获得的半敲Sp7‑Cre；MACF1fl/+小鼠自交，获得MACF1基因在成骨细胞中条件性敲除小鼠模型，即全敲Sp7‑Cre；MACF1fl/fl小鼠；其中，所述步骤一、二所得到的小鼠利用特异性引物通过PCR方法进行基因型的鉴定；步骤一所得到的小鼠基因型鉴定的引物为：MACF1‑AP179：5'‑AAAGAAACGGAAATACTGGCC‑3'；MACF1‑AP180：5'‑GCAGCTTAATTCTGCCAAATTC‑3'；步骤二所得到的小鼠基因型鉴定的引物为：Sp7‑iCre‑WT‑F：5'‑TACCAGAAGCGACCACTTGAGC‑3'；iCre‑Mut‑R：5'‑GCACACAGACAGGAGCATCTTC‑3'；所述步骤三、四所得到的小鼠通过双重PCR方法筛选鉴定，基因型鉴定所用的引物为：MACF1‑AP179：5'‑AAAGAAACGGAAATACTGGCC‑3'；MACF1‑AP180：5'‑GCAGCTTAATTCTGCCAAATTC‑3'和Sp7‑iCre‑WT‑F：5'‑TACCAGAAGCGACCACTTGAGC‑3'；iCre‑Mut‑R：5'‑GCACACAGACAGGAGCATCTTC‑3'。