[发明专利]一种广谱溶菌酶的高通量筛选方法有效
| 申请号： | 201710284625.9 | 申请日： | 2017-04-26 |
| 公开（公告）号： | CN107164457B | 公开（公告）日： | 2021-01-26 |
| 发明（设计）人： | 温赛;刘怀然;茅同心 | 申请（专利权）人： | 北京工商大学 |
| 主分类号： | C12Q1/40 | 分类号： | C12Q1/40 |
| 代理公司： | 北京聿宏知识产权代理有限公司 11372 | 代理人： | 吴大建;方莉 |
| 地址： | 100048 北京*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明涉及分子生物学技术领域的一种广谱溶菌酶的高通量筛选方法。该方法包括以下步骤：A，将目标溶菌酶的基因突变文库在真核细胞中进行分泌表达，获得含不同活性目标溶菌酶的发酵液；B，将含不同活性目标溶菌酶的发酵液分别加入到反应体系中进行反应，筛选出对革兰氏阴性菌杀菌活性高的溶菌酶；其中，反应体系包括：胞内表达“供体荧光蛋白‑蛋白酶的识别位点‑受体荧光蛋白”的革兰氏阴性菌、蛋白酶和蛋白酶反应缓冲液。本发明所述筛选方法通过FRET荧光蛋白对与位点特异性蛋白酶的级联，显著提高了检测的灵敏度；同时该方法可利用荧光酶标仪和96微孔板实现溶菌酶的高通量检测。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 广谱 溶菌酶 通量 筛选 方法 | ||
【主权项】：
一种新型广谱溶菌酶的高通量筛选方法，其包括以下步骤：A，将目标溶菌酶的基因突变文库在真核细胞中进行分泌表达，获得含不同活性目标溶菌酶的发酵液；B，将含不同活性目标溶菌酶的发酵液分别加入到反应体系中进行反应，筛选出对革兰氏阴性菌杀菌活性高的溶菌酶；其中，所述反应体系包括：胞内表达“供体荧光蛋白‑蛋白酶的识别位点‑受体荧光蛋白”的革兰氏阴性菌、蛋白酶和蛋白酶反应缓冲液。
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