[发明专利]葡萄糖氧化酶/过氧化氢酶的交联酶聚体的制备方法及其应用

摘要

本发明公开了一种无载体共交联葡萄糖氧化酶/过氧化氢酶聚体的制备方法及其在生产葡萄糖酸或盐的应用，所述的共交联酶聚体Combi‑CLEAs(CAT/GOx)添加了伴刀豆蛋白A(ConA)、聚赖氨酸(EPL)、PEG‑NH2、牛血清蛋白(BSA)、海藻糖或PEG10000为保护剂。本发明制备的共交联酶聚体不但提高了固定化酶的酶活回收率(大于100％)，而且有效的改善了交联酶聚体操作稳定性差的问题，延长了共交联酶聚体的使用寿命。本发明的无载体共交联葡萄糖氧化酶/过氧化氢酶聚体在生产葡萄糖酸或盐的过程中，重复使用20批次后葡萄糖转化率仍保持在90％以上。

主权项

葡萄糖氧化酶/过氧化氢酶的交联酶聚体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将葡萄糖氧化酶、过氧化氢酶溶于水中，按照葡萄糖氧化酶、过氧化氢酶的酶活比为1：1～20混合，得到酶混合溶液；(2)向步骤(1)得到的酶混合溶液中加入蛋白保护剂，得到溶液A，所述的蛋白保护剂为：伴刀豆蛋白A、聚赖氨酸、PEG‑NH2、牛血清蛋白、海藻糖或聚乙二醇；(3)向步骤(2)得到的溶液A中加入沉淀剂和交联剂，得到溶液B，所述的沉淀剂为无水乙醇或异丙醇；所述的交联剂为戊二醛、香草醛、PEG‑CHO中的一种或几种的混合物；(4)向步骤(3)得到的溶液B中加入还原剂，所述的还原剂为硼氢化钠或氰基硼氢化钠，反应，收集固形物，用磷酸缓冲液洗涤，既得到葡萄糖氧化酶/过氧化氢酶的交联酶聚体。