[发明专利]一种基于多种信号放大技术检测溶菌酶的QCM检测方法及应用

摘要

本发明公开一种基于多种信号放大技术检测溶菌酶的QCM检测方法及应用，DNA与溶菌酶适体部分互补杂交，通过溶菌酶与适体的特异性结合反应，将DNA释放出来。释放的DNA与金片上修饰的发卡DNA和助理DNA互补杂交形成“Y”型结构，在限制性内切酶的作用下，通过特异性识别位点剪切打开发卡DNA，在DNA连接酶和DNA聚合酶的作用下，以锁扣环状DNA为模板链，沿被打开的发卡DNA聚合生长，形成一条具有大量重复序列的单链。标记有生物素的信号探针与生成的重复序列杂交互补，并与HRP标记的链酶亲和素结合后催化过氧化氢氧化4‑氯萘酚发生沉淀反应，从而增加了芯片表面质量，实现了QCM对溶菌酶的高灵敏度检测。

主权项

一种基于多种信号放大技术检测溶菌酶的QCM检测方法，其特征是，该检测方法包括：将连接有磁珠载体的溶菌酶适体与主DNA部分互补杂交，通过溶菌酶与溶菌酶适体的特异性结合反应，将主DNA释放出来；主DNA与助理DNA和连接有金片的发卡DNA互补杂交形成Y型结构；在限制性核酸内切酶作用下，通过特异性识别位点剪切打开发卡DNA，并游离出完整的主DNA循环使用，完整的主DNA与其他发卡DNA和助理DNA形成模板增强杂交；在DNA连接酶和DNA聚合酶的作用下，以锁扣环状DNA为模板链，沿被打开的发卡DNA聚合生长，形成一条具有若干段重复序列的DNA单链；标记有生物素的信号探针与生成的DNA单链中的重复序列杂交互补，并与HRP标记的链酶亲和素结合后催化过氧化氢氧化4‑氯萘酚发生沉淀反应，从而增加了金片表面质量，实现QCM对溶菌酶的检测；其中，所述主DNA包括相互连接的第一段主DNA和第二段主DNA，所述第一段主DNA与部分溶菌酶适体序列互补杂交；所述助理DNA包括相互连接的第一段助理DNA和第二段助理DNA，所述第二段助理DNA与部分第一段主DNA序列互补杂交；所述发卡DNA中环状序列中包含限制性内切酶的特异性识别位点，部分环状序列能与第二段主DNA互补杂交，部分环状序列能与第一段助理DNA互补杂交，从而形成Y型结构。