[发明专利]一种检测细胞内与p53转录激活域相互作用蛋白的方法在审
| 申请号： | 201710300083.X | 申请日： | 2017-05-02 |
| 公开（公告）号： | CN107290543A | 公开（公告）日： | 2017-10-24 |
| 发明（设计）人： | 吴英松;李明;熊玉锋;郝文波;刘天才 | 申请（专利权）人： | 南方医科大学 |
| 主分类号： | G01N33/68 | 分类号： | G01N33/68;G01N21/76 |
| 代理公司： | 广州科粤专利商标代理有限公司44001 | 代理人： | 郝文婷 |
| 地址： | 510515 广东省广州*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种检测细胞内与p53转录激活域相互作用蛋白的方法，其是将待测样品与含有p53‑His重组蛋白的细胞裂解液、包被有p53单克隆抗体的发光微球、生物素化的His标签抗体和链霉亲和素包被的感光微球混合反应后，使用光激化学发光分析仪测量反应孔的光信号值，根据光信号值即可检测样品中是否存在与p53转录激活域相互作用的蛋白。本发明以光激化学发光免疫检测技术为基础，通过构建真核表达载体并在细胞中表达以获得含有p53‑His重组蛋白的细胞裂解液，能使包被有p53单克隆抗体的发光微球与结合了生物素化His标签抗体的感光微球之间的距离小于200nm。本发明方法可用于筛选检测与p53转录激活域相互作用的蛋白，具有操作简单、信噪比高，便于高通量筛选的优点。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 检测 细胞内 p53 转录 激活 相互作用 蛋白 方法 | ||
【主权项】：
一种检测细胞内与p53转录激活域相互作用蛋白的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将人源p53编码序列插入真核表达载体pENTER中，得到pENTER‑p53重组质粒；(2)将步骤(1)所得pENTER‑p53重组质粒转染HEK 293T细胞；(3)用细胞裂解液裂解步骤(2)所述细胞，离心取上清，得到含有p53‑His重组蛋白的细胞裂解液；(4)制备包被有p53单克隆抗体的发光微球和生物素化的His标签抗体；(5)在反应孔中加入样品，然后依次加入步骤(3)所述含有p53‑His重组蛋白的细胞裂解液、步骤(4)所述包被有p53单克隆抗体的发光微球和生物素化的His标签抗体混合反应，再加入链霉亲和素包被的感光微球混合反应；(6)使用光激化学发光分析仪测量反应孔的光信号值，根据光信号值即可检测样品中是否存在与p53转录激活域相互作用的蛋白。
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