[发明专利]一种检测食源性致病菌生物芯片的制备方法

摘要

本发明公开了一种检测食源性致病菌生物芯片的制备方法，属于食源性致病微生物检测技术领域，本发明以食源性致病菌独有的蛋白基因序列设计其特异性的CP、DP和RCP。CP和DP含有与待检菌基因组DNA特异性序列互补的序列，RCP不含任何待检菌基因组DNA序列；CP点样固定在醛基修饰的芯片表面，制备成捕获探针微阵列，在片CP和DP与待检菌基因组DNA退火并连接，加入链亲和素与固相RCA扩增产物结合，在一定的条件下洗脱。用近红外荧光成像仪扫描芯片，检测CP与DP能否连接，以及能否实现滚环扩增和检测靶标，从而特异性检测目标食源性致病菌。该方法可检测多种食源致病性微生物，适用于食品、养殖及口岸等多种食源致病性微生物高通量、快速、准确检测。

主权项

一种检测食源性致病菌生物芯片的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：第1步、将硅烷化处理的玻片用5％的戊二醛处理，然后依次用丙酮、乙醇、去离子蒸馏水彻底清洗，干燥后得到醛基修饰的玻片；第2步、设计各食源性致病菌特异性的捕获探针CP、检测探针DP、滚环探针RCP、靶标探针TP、阴性对照探针NC和阳性对照探针PC；第3步、将经5′‑氨基修饰的CP、PC和NC点样在第1步制备的玻片表面，点样的微阵列经水化和NaIO4还原处理后，制备成CP、PC和NC微阵列；第4步、将DP、RCP和待检细菌基因组gDNA混合变性后加入到第3步制备的微阵列上退火并连接；第5步、对第4步退火的微阵列经洗脱后，在芯片表面的基因结构中加入滚环扩增RCA反应体系物，进行在片滚环扩增RCA并引入biotin‑dUTP，经扩增和洗涤后，加入链亲和素与RCA扩增产物结合，在一定的条件下洗脱，用近红外荧光成像仪扫描芯片，获得检测结果。