[发明专利]一种荞麦RNA的优化提取方法

摘要

本发明提供了一种荞麦RNA的优化提取方法，本发明具体采用十六烷基三甲基溴化铵优化提取荞麦根、茎和叶RNA；所需玻璃器皿、枪头、EP管和去离子水通过高压湿热灭菌消毒，采用CTAB去除多糖和酚类等物质，聚乙烯吡咯烷酮和β‑巯基乙醇去除酚类物质，异丙醇沉淀RNA效果明显，Tris‑HCl缓冲液和NaCl起到防止RNA降解作用。本发明技术方案可分别提取荞麦根、茎和叶不同部位RNA，提取浓度可达到100~500 ng/μL，可用于RT‑qPCR和RACE等后续实验。本发明操作简便快捷，成本低，获得RNA的浓度和纯度较高。

主权项

一种荞麦RNA的优化提取方法，其特征在于，它包括以下步骤：（1）灭菌处理：对所用的器皿和器具进行高压湿热灭菌消毒；（2）配制Tris‑HCl缓冲溶液和CTAB提取溶液，所述CTAB提取液包含质量比为3% CTAB、质量比为2% PVP、25 mmol/L EDTA、2 mol/L NaCl，用pH 8.0的Tris‑HCl缓冲液配制；（3）研磨样品：将荞麦的待提取材料放入EP管中，置液氮环境下研磨直至研磨成粉末；（4）提取液浸提：加入预热的所述CTAB提取液于样品中，快速混匀，再加入β‑巯基乙醇，快速混匀，再加入氯仿‑异戊醇萃取，混匀后静置，离心后取上清液；（5）重复步骤（4）萃取，向上清液中加入氯仿‑异戊醇，混匀后静置，4 ℃离心，取上清液；（6）然后向上清液中加入4 ℃异丙醇溶液，混匀后置于‑20 ℃下10 ~ 30 min沉淀RNA，4 ℃离心，EP管底部为RNA沉淀，倒掉上清液，乙醇清洗两次，4 ℃离心；（7）向沉淀中加双蒸水，50 ~ 60 ℃温浴后震荡混匀获得荞麦RNA，做电泳定性检测或定量测定RNA浓度。