[发明专利]一种食品中蛋白质定量检测用特征肽段的筛选方法

摘要

本发明公开了一种食品中蛋白质定量检测用特征肽段的筛选方法，属于蛋白质定量检测技术领域。所述筛选方法包括(1)利用BLAST比对分析待测蛋白质理论酶解肽段对应的匹配得分与干扰数目；(2)经高效液相色谱串联质谱分析目标肽段的质谱响应值和碎片丰度；(3)利用拟合曲线计算目标肽段在酶解1～3小时的酶解比率；(4)计算目标肽段的回收率和精密度。本发明联合利用多种方法从特异性、质谱特性、酶解特性、准确性和稳定性等方面综合筛选适用于蛋白质准确定量的特征肽段；筛选出的特征肽段可满足高效液相色谱串联质谱法对食品基质中蛋白质的定量检测要求，实现灵敏度高，精密度好，重现性佳的蛋白质定量检测。

主权项

一种食品中蛋白质定量检测用特征肽段的筛选方法，其特征在于，包括：(1)利用BLAST比对分析待测蛋白质理论酶解肽段对应的匹配得分与干扰数目，选择匹配得分≥20、干扰数目≤5的理论酶解肽段为候选肽段；(2)将待测蛋白质样品酶解得到肽段混合液，经高效液相色谱串联质谱分析所述的候选肽段的质谱响应值和碎片丰度，选择蛋白质组学软件评分为黄色和绿色的候选肽段为候选目标肽段；(3)测量待测蛋白质样品在不同酶解时间对应生成的所述候选目标肽段浓度，将其代入方程拟合得到所述候选目标肽段的酶解曲线方程，根据酶解曲线方程计算在酶解1～3小时对应所述候选目标肽段的酶解比率，选择酶解比率为100±10％的候选目标肽段为候选特征肽段；其中，c为对应酶解时间t时目标肽段的浓度；a为初始条件下的蛋白质浓度；a＝A，k＝(1+KM/A)以及m＝vmax/A；(4)待测蛋白质样品与加标物混合后得到加标样，分别测量加标样酶解生成的所述候选特征肽段浓度，计算所述候选特征肽段的回收率和精密度，回收率＝100±10％和精密度≤10％的候选特征肽段即为所述的特征肽段。