[发明专利]一种检测待测样本中目标蛋白的含量的方法有效
| 申请号： | 201710306828.3 | 申请日： | 2017-05-04 |
| 公开（公告）号： | CN108802366B | 公开（公告）日： | 2020-01-21 |
| 发明（设计）人： | 于瑶;韩剑;林白雪;陶勇 | 申请（专利权）人： | 中国科学院微生物研究所;中国科学院大学 |
| 主分类号： | G01N33/535 | 分类号： | G01N33/535;G01N33/68 |
| 代理公司： | 11245 北京纪凯知识产权代理有限公司 | 代理人： | 关畅 |
| 地址： | 100101 北京市*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种检测待测样本中目标蛋白的含量的方法。该方法通过引入能够与目标蛋白紧密结合的目标蛋白抗体与在大肠杆菌体内通过BirA蛋白催化而被生物素修饰的不同数量bap肽段的融合蛋白，将生物素‑亲和素系统与抗原‑抗体相互作用连接起来，从而实现基于生物素‑亲和素系统的不同级数的放大。实验证明，采用本发明提供的方法可检测待测样本中目标蛋白的含量，还能够根据目标蛋白的浓度调整融合蛋白的种类、比例、浓度来满足不同的检测需求。本发明具有重大的应用价值。 | ||
| 搜索关键词： | 目标蛋白 待测样本 亲和素系统 融合蛋白 生物素 种检测 抗体 生物素修饰 大肠杆菌 浓度调整 可检测 抗原 肽段 催化 蛋白 放大 体内 检测 引入 应用 | ||
【主权项】：
1.一种检测待测样本中目标蛋白的含量的方法，包括步骤（a）、步骤（b）和步骤（c）：/n所述步骤（a）包括如下步骤：/n（a-1）复合物和待测样本混匀，孵育；/n（a-2）完成步骤（a-1）后，采用亲和素检测荧光信号值；/n所述步骤（b）包括如下步骤：/n（b-1）所述复合物和目标蛋白标准溶液混匀，孵育；/n（b-2）完成步骤（b-1）后，采用所述亲和素检测荧光信号值；/n所述步骤（c）：根据所述目标蛋白标准溶液中目标蛋白的浓度和相应荧光信号值绘制标准曲线，将所述步骤（a-2）得到的荧光信号值代入所述标准曲线，得到待测样本中目标蛋白的含量；/n所述复合物为一个末端连接目标蛋白抗体、另一个末端连接生物素的特异肽段；所述特异肽段为a1）或a2）或a3）或a4）：a1）bap1肽段；a2）bap2肽段； a3）bap5肽段；a4）bap10肽段；/n所述bap1肽段为氨基酸序列是序列表中序列3自N端起第222至238位所示的肽段；所述bap2肽段为氨基酸序列是序列表中序列6自N端起第222至263位所示的肽段；所述bap5肽段为氨基酸序列是序列表中序列9自N端起第222至338位所示的肽段；所述bap10肽段为氨基酸序列是序列表中序列12自N端起第222至463位所示的肽段；/n所述生物素可与亲和素结合。/n
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