[发明专利]一种TaqDNA聚合酶活性检测方法

摘要

本发明的一种Taq DNA聚合酶活性检测方法，该方法包括模板和引物的设计，PCR反应体系的配制、PCR反应条件的设置和TaqDNA聚合酶活性的判断。该方法操作简便，准确、灵敏度高，微弱的Taq DNA聚合酶活性也可以被有效检测。即解决了终点法的操作步骤多，耗时长，人为因素影响大的问题，也解决了荧光定量PCR检测法中受Taq酶活性的变化而影响检测准确性的问题。本发明的一种Taq DNA聚合酶活性检测方法，建立了Taq DNA聚合酶活性的检测标准，克服现有方法的主观性和随意性，客观、高效。本发明可促进Taq DNA聚合酶相关技术的发展，带动PCR相关技术的改进，具有较强的实用性；本发明不仅可以用于Taq DNA聚合酶活性的检测，还可以用于其他耐热DNA聚合酶的活性的检测，如Tth DNA聚合酶、pfu DNA聚合酶等。

主权项

一种 Taq DNA 聚合酶活性检测方法，其特征在于 ：（1）引物和模板的设计及合成选择任意一段已知序列的DNA作为模板，根据模板DNA序列，设计一条PCR 引物并进行人工合成；人工合成一段单链核酸片段，使其 5’端部分与上述PCR引物互补，将这段单链核酸片段命名为模板 ；（2）PCR 反应前模板与引物的处理用稀释液分别稀释合成的引物和模板，备用 ；（3）PCR 反应体系的配制将模板、引物、PCR 缓冲液、氯化镁、dNTP 、荧光染料和待测定的 Taq DNA 聚合酶，加入同一个 PCR 管中，组成 PCR 反应体系 ；（4）PCR 反应将上述步骤（3）装有 PCR 反应体系的 PCR 管置于能够读取荧光的设备中，设置PCR条件为 37℃，60 min，PCR 反应结束后获得 PCR 反应产物，由设备收集扩增曲线图谱 ；（5）Taq DNA 聚合酶的判断分析上述步骤 (4) 所获得的扩增曲线图谱得出该酶的初始线性斜率，将该斜率置于标准曲线中，计算出未知Taq DNA 聚合酶活性。