[发明专利]一种食品中合成着色剂的色谱测定方法

摘要

本发明公开一种食品中合成着色剂的色谱测定方法，包括步骤样品提取、样品净化、配置人工着色剂混合标准应用液、将人工着色剂混合标准应用液注入液相色谱仪测定，检测波长柠檬黄428mm、苋菜红521mm、酸性靛蓝608mm、胭脂红509 mm、日落黄483 mm、诱惑红507 mm、亮蓝625 mm以及赤藓红529 mm；得到八种人工合成着色剂的液相色谱图和峰面积，绘制标准系列的线性方程；将样品溶液注入液相色谱仪测定，得到样品色谱峰，保留时间定性；样品峰面积带入标准系列的线性方程，计算出目标化合物的浓度，外标法定量；根据公式计算八种人工合成着色剂的含量；该方法快速简便、灵敏度高、干扰少、结果准确、重现性好，能较好地应用于实际食品样品的检测。

主权项

一种食品中合成着色剂的色谱测定方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、样品提取称取2g食品样品至离心管中，a）对于液体食品样品，加入乙酸锌溶液和草酸钾/磷酸氢二钾溶液，沉淀蛋白质，再用10%氨水调pH至6，然后用水定容至10 mL，离心处理，得到待净化的样品上清液；b）对于配制酒类样品，加热除去乙醇，用氨水溶液调pH至6，然后用水定容至10 mL，离心处理，得到待净化的样品上清液；c）对于固体食品样品，均质后用氨化甲醇溶液重复提取至提取液无色，合并提取液于60℃水浴蒸发，用水定容至10 mL，离心处理，得到待净化的样品上清液；d）对于肉类样品，均质后石油醚脱脂，再用氨化甲醇溶液重复提取至提取液无色，合并提取液于60℃水浴蒸发，用水定容至10 mL，离心处理，得到待净化的样品上清液；S2、样品净化取5 mL步骤S1得到的样品上清液，以1 mL/min的速度通过弱阴离子固相萃取柱，再分别用6 mL pH4水溶液、6 mL pH6水溶液以及6 mL甲醇淋洗弱阴离子固相萃取柱，然后将弱阴离子固相萃取柱通入空气吹干；之后用6 mL氨化甲醇洗脱并收集，60℃水浴氮气吹干，再加1 mL水复溶，混匀，上清液为样品溶液，供液相色谱分析；S3、配置人工着色剂混合标准应用液准确称取0.5 mg/mL柠檬黄标准储备液、0.5 mg/mL苋菜红标准储备液、0.5 mg/mL胭脂红标准储备液、0.5 mg/mL日落黄标准储备液、1.0 mg/mL诱惑红标准储备液、0.5 mg/mL亮蓝标准储备液、1.0 mg/mL赤藓红标准储备液以及0.5 mg/mL酸性靛蓝标准储备液，并用水配制成0.2 µg/mL、0.5 µg/mL、2.0 µg/mL、5.0 µg/mL、10 µg/mL和20 µg/mL的系列人工着色剂混合标准应用液；S4、将步骤S3配置的人工着色剂混合标准应用液注入液相色谱仪测定，液相色谱测定条件为：色谱柱：C18，4.6 × 250 mm，5 μm；流动相：A为乙酸铵溶液，B为甲醇；流速：1.0 mL/min；柱温：30℃；进样量：20 µL；梯度洗脱程序：0.0～5.0min，80%A～65%A和20～35%B；5.0～12.0min，65%A～20%A和35～80%B；12.0～16.0min， 20%A和80%B；16.0～17.0min， 20%A～80%A和80～20%B；17.0～20.0min， 80%A和20%B；检测波长：柠檬黄428mm、苋菜红521mm、酸性靛蓝608mm、胭脂红509 mm、日落黄483 mm、诱惑红507 mm、亮蓝625 mm以及赤藓红529 mm；得到八种人工合成着色剂的液相色谱图和峰面积，绘制标准系列的线性方程；S5、将步骤S2得到的样品溶液注入液相色谱仪测定，液相色谱测定条件与步骤S3相同，得到样品色谱峰，保留时间定性；样品峰面积带入标准系列的线性方程，计算出目标化合物的浓度，外标法定量；S6、根据公式计算八种人工合成着色剂的含量；上式中X 为样品试样中目标化合物含量， C为由标准的线性方程得到的样品试样溶液中目标化合物含量， V 为样品试样的最终定容体积， m为样品试样的质量， f 为样品试样稀释倍数；以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。