[发明专利]利用GST表达体系制备抗人PIAS3高效价抗体及应用

摘要

本发明属于生物工程技术领域，涉及利用GST表达体系制备的抗PIAS3 87‑121aa高效价抗体及应用。利用基因工程技术，将PIAS3 87‑121aa克隆到原核表达载体中，经酶切鉴定后，用重组质粒转化大肠杆菌，并IPTG诱导产生GST‑PIAS3 35aa融合蛋白。以纯化的融合蛋白免疫新西兰兔制备抗血清并用ProteinA/G纯化。抗体的效价及特异性采用ELISA和Western blot检测，并应用免疫组化的方法，应用该抗体检测到68KD全长的PIAS3蛋白位于前列腺上皮细胞的细胞质中表达，而在癌组织中表达缺失，这对于揭示PIAS3蛋白的功能意义重大。

主权项

利用GST表达体系制备的抗人PIAS3 Exon2 35aa高效价抗体，其特征在于利用GST表达体系以人PIAS3 87‑121位氨基酸对应DNA片段作为特异序列，制备的GST‑PIAS3 Exon2 35aa融合蛋白作为抗原免疫新西兰家兔产生抗血清而获得，该抗血清中抗GST‑PIAS3 Exon2 35aa抗体的滴度高达1∶1000000，并经过Western blot鉴定该抗PIAS3 Exon2 35aa抗体具有较好的特异性，其中，87‑121位氨基酸序列为：其对应核苷酸序列为：1 gtaggctccc ctggtcctct agctcccatt cccccaacgc tgttggcccc tggcaccctg61 ctgggcccca agcgtgaggt ggacatgcac ccccctctgc cccag。