[发明专利]一种能够快速构建植物基因定点敲除载体的新反应体系有效
| 申请号： | 201710316378.6 | 申请日： | 2017-05-08 |
| 公开（公告）号： | CN107254485A | 公开（公告）日： | 2017-10-17 |
| 发明（设计）人： | 万建民;陈赛华;江玲;王益华;王迪;郑天慧;李景芳;赵志刚;刘裕强 | 申请（专利权）人： | 南京农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;C12N9/22;A01H5/00 |
| 代理公司： | 南京天华专利代理有限责任公司32218 | 代理人： | 徐冬涛;杜静 |
| 地址： | 211225 江苏省南京市溧*** | 国省代码： | 江苏;32 |
| 权利要求书： | 暂无信息 | 说明书： | 暂无信息 |
| 摘要： | 本发明公开一种能够快速构建植物基因定点敲除载体的新反应体系，包括：(1)基于CRISPR‑Cas系统的载体，所述载体具有如下特征的DNA分子：在农杆菌侵染法转化到植物后，能够同时实现OsU3启动子驱动SgRNA的转录和Ubiquitin启动子驱动Cas9蛋白表达的载体；(2)限制性内切酶AarⅠ；(3)限制性内切酶AarⅠ反应所需的buffer和Oligo；(4)靶基因位点特异性的DNA双链；(5)T4DNA连接酶及该酶反应所需的ATP。本发明所述体系只需5‑10个反应循环就能快速高效完成质粒的构建过程，极大简化了操作流程，满足快速、高通量构建植物基因定点敲除质粒的需求。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 能够 快速 构建 植物 基因 定点 载体 反应 体系 | ||
【主权项】：
一种能够快速构建植物基因定点敲除载体的新反应体系，其特征在于，包括：(1)基于CRISPR‑Cas系统的载体，所述载体具有如下特征的DNA分子：在农杆菌侵染法转化到植物后，能够同时实现OsU3启动子驱动SgRNA的转录和Ubiquitin启动子驱动Cas9蛋白表达的载体；(2)限制性内切酶Aar Ⅰ；(3)限制性内切酶Aar Ⅰ反应所需的buffer和Oligo；(4)靶基因位点特异性的DNA双链；(5)T4DNA连接酶及该酶反应所需的ATP。
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