[发明专利]一种快速检测埃博拉病毒的荧光恒温检测试剂盒

摘要

本发明公开了一种快速检测埃博拉病毒的荧光恒温检测试剂盒，该试剂盒是一种基因在恒定温度下进行荧光扩增和检测的试剂盒。本发明的荧光恒温扩增反应试剂配合一种双色荧光标记的探针，适合对埃博拉病毒(埃博拉‑扎伊尔型（Ebola‑Zaire，EBOV‑Z）、埃博拉‑苏丹型（Ebola‑Sudan，EBOV‑S）、埃博拉‑本迪布焦型（Ebola‑Bundibugyo，EBOV‑B）、埃博拉‑莱斯顿型（Ebola Reston，EBOV‑R）和埃博拉‑科特迪瓦型（Ebola Coast，EBOV‑C）)进行快速荧光检测。本发明的恒温扩增体系，真正实现在同一个温度下进行基因扩增反应，其组成更为简单，成本更为低廉，使用更为方便。本发明的恒温扩增体系适用于复杂模板的扩增，扩增速度快且稳定，可以在30min以内完成扩增反应，扩增的灵敏度和准确性高，不易出现错配，扩增效果好。

主权项

一种快速检测埃博拉病毒的荧光恒温检测试剂盒，包括RNA提取液，反应液，启动液，反应酶系，埃博拉病毒的特异性引物及探针，内标18S RNA的特异性引物及探针，阴阳性质控品，其特征在于：所述埃博拉病毒的特异性引物及探针序列如下：检测扎伊尔埃博拉病毒的上游引物的序列为：GGTGAGCATGCCACAGTTAGAGGGAGTAGCTT（SEQ ID NO：1）；下游引物的序列为：CATAGCAACGGTTACAATATTCTATAAAAGGT（SEQ ID NO：2）；荧光探针序列为：FAM‑TAAC(dSpacer)GATTTAGAGAAATACAATCTTGCATTTA‑BHQ（SEQ ID NO：3）；检测苏丹埃博拉病毒的上游引物序列为：CTCTATGACAGGCTGGCTTCAACTGTAATTTAC（SEQ ID NO：4）；下游引物的序列为：AGTTTACTGCCTCTCGAATGGGGGGTGACTGAA（SEQ ID NO：5）；荧光探针序列为：FAM‑CTGA(dSpacer)GGGGTAATTGCATTCTTGATATTGGCT‑BHQ（SEQ ID NO：6）；检测本迪布焦埃博拉病毒的上游引物的序列为：ACAGGCAAGATTCCGATTACCGATATCTTCAA（SEQ ID NO：7）；下游引物的序列为：GGTCTGGACACTGCGTGTTTGAACACTTGG（SEQ ID NO：8）；荧光探针序列为：FAM‑GAAA(dSpacer)TTGAAACCTTACCTAGTATAAGTCCCT‑BHQ（SEQ ID NO：9）；检测莱斯顿埃博拉病毒的上游引物的序列为：TTTCTTGATTTGAACATAGTCATAAGGGGATAAAT（SEQ ID NO：10）；下游引物的序列为：GATCACATTTTCAATGGGCGAAGCATTTTAAGCA（SEQ ID NO：11）；荧光探针序列为：FAM‑TACT(dSpacer)TATATTTCTGATTGTGGATTGACCCAT‑BHQ（SEQ ID NO：12）；检测科特迪瓦埃博拉病毒的上游引物的序列为：AACCCTTTCAAGTGAAGAGTTGTCTTTCGTACC（SEQ ID NO：13）；下游引物的序列为：GGTTGTGGGCGGAGATGGGAGGAGAGACCGTCG（SEQ ID NO：14）；荧光探针序列为：FAM‑CCAG(dSpacer)AACCCAGAACCAGGTCCTTGACACGA‑BHQ（SEQ ID NO：15）；所述内标18S RNA的特异性引物及探针序列如下：检测内标18S RNA的上游引物的序列为：GTCTGGTTAATTCCGATAACGAACGAGACTCT（SEQ ID NO：16）；下游引物的序列为：GCATCACAGACCTGTTATTGCTCAATCTCGG（SEQ ID NO：17）；荧光探针序列为：VIC‑CATG(dSpacer)TAACTAGTTACGCGACCCCCGAGCGGTC‑BHQ（SEQ ID NO：18）。