[发明专利]一种二氢硫辛酸脱氢酶LPD的表达和纯化方法

摘要

本发明公开了一种二氢硫辛酸脱氢酶LPD的表达和纯化方法，属于蛋白分子的表达和纯化领域。本发明主要包括以下步骤:克隆大肠杆菌的lpdA基因；构建重组表达质粒并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中；通过抗性筛选，得到高水平表达的大肠杆菌转化子；转化子在摇瓶中扩大培养后，把破菌液上清用羟基磷灰石层析柱纯化得LPD蛋白。经SDS‑PAGE检测，LPD蛋白纯度达95％以上。本发明具有表达稳定、操作简便、成本低、效率高的优点，特别是通过此种方式获得的LPD蛋白不含任何的标签，很好地保持了目的蛋白的天然构象和活性，能为LPD蛋白研究提供优质材料。

主权项

1.一种二氢硫辛酸脱氢酶LPD的表达方法，其特征在于：克隆二氢硫辛酸脱氢酶的全部基因，并与克隆载体体外构建重组表达质粒，然后将构建的重组表达质粒转化宿主大肠杆菌，表达二氢硫辛酸脱氢酶LPD；所述克隆载体为pBR322质粒；构建重组表达质粒时，通过限制性内切酶位点NheI和AvaI构建重组表达质粒；构建重组表达质粒时，保留了pBR322的Amp抗性编码序列，剔除了Kan抗性编码区域。