[发明专利]一种VEGF转染生物活性玻璃组织修复材料的制备方法

摘要

一种VEGF转染生物活性玻璃组织修复材料的制备方法，属于复合生物材料制备领域，改制备方法主要包括制备VEGF悬液、制备多巴胺修饰溶液、制备生物活性玻璃纳米膜、喷涂多巴胺修饰溶液、浸泡VEGF悬液。通过本方法制得的VEGF转染生物活性玻璃组织修复材料，进一步提高了组织修复材料的细胞粘附性及生物活性。

主权项

一种VEGF转染生物活性玻璃组织修复材料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一：将1ml LB液体培养基和20μL、10％v/v葡萄糖置于离心管中，将1mg pMal‑V2/MBP‑VEGF加入到离心管中，置于30℃，120‑260rpm/min，震荡培养过夜，得VEGF悬液；步骤二：将350mg明胶溶解于60mL水中，水浴加热到50℃搅拌至完全溶解制得明胶溶液；步骤三：将明胶溶液与150mg N‑羟基丁二酰亚胺、191mg 1‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺及103mg多巴胺混合，在电热恒温水槽中40℃搅拌48小时后，将溶液置于透析袋中，放入盛有超纯水的烧杯中，并置于电热恒温水槽于40℃条件下搅拌2‑3day，且每隔8h换一次超纯水；步骤四：取出透析袋中残留的溶液，置于‑20℃冷冻箱中冷冻8h，再置于冻干机上干燥48h，得粘附性明胶；步骤五：将粘附性明胶制成3mg/ml的水溶液，用HCl和NaOH调节水溶液pH值至7，即得多巴胺修饰溶液；步骤六：将15g十六烷基三甲基溴化铵溶于500ml 35℃的去离子水中，加入3.9g正硅酸乙酯和3.54g Ca(NO3)2·4H2O，用硝酸调节pH到2，水解4小时以后，加入0.435gNH4H2PO4并用NH3·H2O调节pH＝10，反应12h后，把温度升到95℃沉化48小时，将反应液离心分离，用去离子水反复清洗，冷冻干燥，得介孔纳米生物活性玻璃；步骤七：将介孔纳米生物活性玻璃按质量浓度为20％溶解于四氢呋喃中，使用超声波震荡对其进行分散，磁力搅拌1h溶解，制得溶液，将溶液在60℃水浴箱中，回流加热，磁力揽拌2h，直至全部溶解，将溶液转移至模具中，并迅速放入零下20℃低温冰箱中，待其形成凝胶后，在凝胶化温度下保持2h；步骤八：将凝胶转入4℃冰箱中进行水置换1d，在冷冻干燥机中于‑55℃、气压低于50Pa冻干48h，得到介孔纳米生物活性玻璃薄膜；步骤九：将多巴胺修饰溶液均匀喷涂于介孔纳米生物活性玻璃薄膜表面，并于37℃干燥箱干燥12h后，用磷酸盐缓冲液(PBS)漂洗3次；步骤十：将介孔纳米生物活性玻璃薄膜浸泡于VEGF悬液中48h得VEGF转染生物活性玻璃组织修复材料。