[发明专利]一种楸树遗转化体系的构建方法

摘要

本发明公开了一种楸树遗传转化体系的构建方法。其中包含以楸树的胚性愈伤组织为转化受体，进行潮霉素临界致死浓度的筛选、通过农杆菌介导法辅以超声波处理进行侵染转化、抗性再生胚性愈伤组织和再生植株的检测等过程。本发明的遗传转化方法首次以楸树的胚性愈伤组织为受体，侵染材料的转化群体大，胚性细胞再生能力强；胚性愈伤组织的长期稳定的继代保存可满足周年进行遗传转化的需求；再辅以超声波处理侵染转化楸树胚性愈伤组织，转化效率高。通过本发明成功地将载体T‑DNA区整合到楸树基因组中，并设计特异性引物检测转基因楸树再生植株。本发明适用于楸树的分子遗传改良和检测，以及由该转化事件获得的转基因楸树为供体进而获得各种转基因新品种。

主权项

一种楸树遗转化体系的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：1）胚性愈伤组织的潮霉素临界致死浓度的确定：将楸树幼胚诱导的胚性愈伤组织接种到附加不同浓度的潮霉素的选择培养基中培养统计存活率，得到胚性愈伤组织的潮霉素临界致死浓度；2）农杆菌介导辅以超声波处理进行侵染转化：使用含有目的基因的农杆菌工程菌液对胚性组织进行侵染转化，侵染的同时进行超声波辅助处理；3）侵染处理的胚性愈伤组织的共培养和选择培养：经过步骤2）侵染转化后将胚性愈伤组织置于增殖培养基中进行共培养，共培养后转置于选择培养基中进行转化子的选择培养，选择培养过程中未转化组织将被抗生素杀死，存活下来的抗性愈伤组织和再生植株可进行下一步的转化检测；4）转化愈伤组织的报告基因瞬时表达和再生植株的PCR检测：对经过步骤3）共培养后的胚性愈伤组织进行报告基因的瞬时表达检测，对步骤3）选择培养过程中获得抗性再生植株进行PCR扩增检测；完成楸树遗转化体系的构建。