[发明专利]垂丝海棠花多糖、提取方法及其在制备促凝血药物方面的应用

摘要

本发明涉及一种垂丝海棠花多糖的提取方法，具体为：1）将垂丝海棠花粉碎，常温下依次用石油醚、70±5%乙醇浸提，过滤，烘干残渣，然后用蒸馏水提取，滤液减压浓缩，然后醇沉，沉淀干燥后用蒸馏水溶解，采用Sevag法脱除蛋白，将得到的上清液减压浓缩后再次醇沉，沉淀干燥后用蒸馏水溶解，透析，冷冻干燥即得粗多糖；2）将粗多糖用蒸馏水溶解，上样到DEAE‑52色谱柱，分别用0.0、0.1、0.2 mol/L NaCl进行梯度洗脱，收集合并组分相同的溶液，减压浓缩，透析，冷冻干燥；再次用蒸馏水溶解，上样到Sephadex G‑100色谱柱中用蒸馏水洗脱，合并组分相同的溶液，减压浓缩后冷冻干燥即得。凝血试验表明垂丝海棠花多糖具有一定的体外促凝血活性，可作为一种潜在的止血药。

主权项

1.垂丝海棠花多糖在制备促凝血药物方面的应用，其特征在于，所述垂丝海棠花多糖经下述步骤制备获得： 1）制备粗多糖：将垂丝海棠花粉碎，在常温条件下依次用石油醚、70±5%乙醇进行浸提，浸提结束后过滤，烘干残渣，然后用蒸馏水于90±5℃进行提取，提取结束后趁热抽滤，滤液减压浓缩获得浓缩液，然后向浓缩液中加入乙醇使终浓度为70±2%，静置，离心得一次沉淀，一次沉淀干燥后用蒸馏水溶解，采用Sevag法脱除蛋白，将得到的上清液减压浓缩后再次加入乙醇并使终浓度为70±2%，静置，离心得二次沉淀，干燥，加入蒸馏水溶解后，透析，透析结束后冷冻干燥即得粗多糖；2）将粗多糖用蒸馏水溶解，0.45 μm微孔滤膜过滤，上样到DEAE‑52色谱柱，依次用蒸馏水、0.1 mol/L氯化钠溶液和0.2 mol/L氯化钠溶液进行洗脱，洗脱液采用苯酚‑硫酸法进行检测，测490 nm处的吸光度，以洗脱管数为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制洗脱曲线，合并同一洗脱峰的多糖样品，减压浓缩，透析，冷冻干燥；其中，蒸馏水的洗脱峰为组分1，0.1 mol/L氯化钠溶液的洗脱峰为组分2，0.2 mol/L氯化钠溶液的洗脱峰为组分3；3）组分1用蒸馏水溶解，0.22 μm微孔滤膜过滤，上样到Sephadex G‑100色谱柱，用蒸馏水进行洗脱，采用苯酚‑硫酸法进行检测，测其在490 nm处的吸光度，以洗脱管数为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制洗脱曲线，得到单一洗脱峰，减压浓缩、冷冻干燥后得到的多糖组分命名为MHP‑W；4）组分2和3均采用步骤3）同样的方法进行洗脱，得到单一洗脱峰，减压浓缩、冷冻干燥后得到的多糖组分分别命名为MHP‑1和MHP‑2；垂丝海棠花多糖即为MHP‑W、MHP‑1和MHP‑2中的一种或两种以上的混合物。