[发明专利]一种樱桃酵素脂质体的制备方法

摘要

一种樱桃酵素脂质体的制备方法，其主要是先由安琪酵母菌、植物乳杆菌和奥尔兰醋杆菌共同发酵樱桃，之后对发酵液进行多次快速反复冻结和融解，以破坏其中发酵菌的细胞壁，使细胞内酶类溶出，制得樱桃酵素；再以磷脂和豆甾醇作为膜材料，通过薄膜水化法包载樱桃酵素，表面使用聚乙二醇修饰，最终制得樱桃酵素脂质体，该纳米微囊可以增加酵素体内循环时间，并实现酵素的缓释。本发明的樱桃酵素脂质体，利于人体的消化吸收，同时通过脂质体的包载，避免酵素酶被胃液破坏，保持结构和活性的稳定、增加其在体内的循环时间，促进人体对樱桃酵素的利用率。

主权项

一种樱桃酵素脂质体的制备方法，其特征在于：它包括以下步骤：一、混合菌发酵制备樱桃酵素原料按质量计量，包括以下组分：安琪酵母菌1‑5份，植物乳杆菌2‑8份，奥尔兰醋杆菌1‑3份，樱桃5000‑7000份，白砂糖1000‑6000份；(1)将樱桃洗净晾干去核去蒂，将发酵容器洗净灭菌烘干；(2)按照上述比例，将三株菌种按质量浓度0.05‑0.2g/mL分别溶于樱桃汁，25‑35℃恒温水浴中均速搅拌10‑40min以活化菌株；(3)将樱桃和白砂糖装入发酵容器中反复堆叠至容器体积的70‑75％，加入容器体积15‑20％的无菌水，将步骤(2)中活化后的三种菌液加入到瓶中，于28‑35℃环境中密封保存；(4)15‑20天后将瓶中发酵液取出过滤除去滤渣；(5)将发酵液在干冰‑水体系和35℃温水中循环浸泡2‑5次，使发酵液经历迅速冻结和融解的循环，以破坏发酵菌和樱桃的细胞壁结构，获取其内酶类；(6)对步骤(5)制得的酵素采用0.45μm无菌微孔滤膜过滤除菌，于4℃保存；二、樱桃酵素脂质体的制备原料按质量计量，包括以下组分：磷脂40‑60份，豆甾醇4‑7份，聚乙二醇3‑8份，樱桃酵素6000‑15000份；(1)将磷脂、豆甾醇、聚乙二醇溶于无水乙醇中，在温度30‑60℃，转速30‑80rpm条件下，真空旋蒸1.5‑6h除去无水乙醇，在瓶壁形成透明脂质薄膜；(2)将步骤一制得的樱桃酵素倒入到步骤(1)的脂质薄膜中，在温度40‑50℃，转速50‑120rpm条件下，常压旋转水化0.5‑2h，形成脂质体乳浊液；(3)对步骤(2)得到的乳浊液进行超声处理，使用水浴超声或者冰浴探头超声，水浴超声100％功率，时间为15‑30min；冰浴探头超声功率为300‑600w，超声模式为工作2‑5秒/间歇2‑5秒，时间为5‑15min，得到脂质体溶液；(4)将步骤(3)得到的脂质体溶液经过无菌微孔滤膜除菌后，在‑20℃冷冻长期保存，或者放置4℃冰箱随时饮用。