[发明专利]BAC克隆DNA的提取方法

摘要

本发明涉及分子生物学和分子遗传学及细胞生物学领域，特别涉及到DNA的提取和纯化方法。本发明采用了磁珠分离与分子筛过滤技术，结合蛋白酶消化技术，发明了BAC克隆DNA的稳定提取方法。本发明利用优化的悬浮、裂解、中和缓冲液获取粗制DNA沉淀；经重悬DNA沉淀，在适宜的pH和离子浓度下，将DNA多聚核苷酸大分子非特异性和可逆地结合到磁性纳米材料的官能基团；通过快速结合、清洗步骤，去除裂解过程的离子、蛋白、糖类等污染物和小分子等杂质；经蛋白酶进一步消化、纯化和过滤装置的浓缩后产生出纯化的DNA产物。本发明操作简单稳定、经济高效、无毒无污染。本发明具备优良的扩展性，能实现标准化的试剂盒套装系列产品和全自动化操作。

主权项

一种BAC克隆DNA的提取方法，其特征在于，其主要步骤包括：(1)BAC克隆大肠杆菌培养：于2mL的LB培养液中加入微量大肠杆菌BAC克隆的冻存原液并进行初始培养4至6小时，从初始培养液中制作克隆平盘，从过夜培养的平盘中挑取克隆并植入500mL含相应抗生素的LB培养液中过夜培养；(2)细菌裂解：将500mL的大肠杆菌培养液进行离心，获取细菌沉淀物，细菌沉淀再经过悬浮，裂解，中和，离心，去除大部分裂解后的杂质，抽取其中上清；(3)DNA沉淀：将含有DNA的上清液与一定体积的异丙醇混合并离心，获取DNA粗制沉淀物；(4)第一次抽提、清洗：DNA粗制沉淀物经TE缓冲液悬浮后与一定比例的磁珠混合，清洗磁珠，获取较纯DNA；(5)第二次抽提、清洗：将步骤(4)获得的DNA再经一定比例的磁珠纯化；(6)DNA再纯化及浓缩：经磁珠提取的DNA进一步通过10kD超滤离心管浓缩，去除微量盐、低分子量核酸与蛋白杂质，最终获取高质量高纯度DNA产物。