[发明专利]一种336型金黄色葡萄球菌中荚膜多糖的提取纯化方法

摘要

本发明公开了一种336型金黄色葡萄球菌中荚膜多糖的提取纯化方法，包括以下步骤：336型金黄色葡萄球菌发酵培养、灭活、离心，从上清液和菌体沉淀中提取荚膜多糖粗制品，再将粗制品脱蛋白后用分子筛排阻层析对其纯化，得到精制荚膜多糖。本发明的有益效果为：采用液体发酵培养，易于工艺放大与实际生产应用；分别从发酵上清液和菌体沉淀中提取多糖，提高了荚膜多糖的生产效率，降低了生产成本；使用Sevage法除蛋白，减少了苯酚的用量，同时减少了操作时间，提高了纯化效率；多糖产量稳定，纯化后的精制多糖符合相关国家质量标准；方法简便、有效，提取的荚膜多糖适用于疾病的诊断、预防和治疗，适用于336型金黄色葡萄球菌荚膜多糖疫苗的制备。

主权项

一种336型金黄色葡萄球菌中荚膜多糖的提取纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：1）发酵培养：将336型金黄色葡萄球菌种子液按体积百分比1%的接种量接种到pH为7.0的装有哥伦比亚培养基的三角摇瓶中，37℃，200rpm/min摇床震荡培养16～18h，收获得到发酵液；2）灭活：将步骤1）得到的发酵液中，按终体积的以体积百分比计0.3%加入甲醛溶液，置37℃摇床灭活20～24h，经灭活检测合格后备用，得到灭活发酵液；3）提取荚膜多糖：将步骤2）得到的灭活发酵液低温离心，采用阳离子去垢剂从发酵上清液中提取荚膜多糖，采用高压裂解法从菌体沉淀中提取荚膜多糖；4）纯化荚膜多糖：采用分子Sevage法抽提多糖中的蛋白质，并利用分子筛排阻层析对脱蛋白的荚膜多糖溶液做进一步纯化。