[发明专利]一种异育银鲫抗CyHV-2口服重组芽孢疫苗及其制备方法

摘要

本发明涉及一种异育银鲫抗鲤疱疹病毒II型(CyHV‑2)口服重组枯草芽孢杆菌芽孢疫苗及其制备方法。该疫苗是用异育银鲫颗粒饲料包被表面展示CyHV‑2免疫保护性抗原的重组枯草芽孢杆菌芽孢CyHV‑2而制得；所述芽孢是具有萌发缺陷、无抗生素抗性基因标记的芽孢。其制备方法是构建萌发缺陷、无抗生素抗性基因标记和表面展示CyHV‑2免疫保护性抗原的重组枯草芽孢杆菌芽孢，制备异育银鲫颗粒饲料包被重组芽孢的CyHV‑2口服重组芽孢疫苗，用于CyHV‑2引起的异育银鲫出血病的防治。本发明制备萌发缺陷、无抗生素抗性基因标记的表面展示CyHV‑2保护性抗原的口服重组芽孢疫苗，具有更安全和高效的特点和优势。

主权项

1.一种异育银鲫抗CyHV‑2口服重组芽孢疫苗，其特征在于，是用异育银鲫颗粒饲料包被表面展示CyHV‑2免疫保护性抗原的重组枯草芽孢杆菌芽孢CyHV‑2而制得；所述芽孢是具有萌发缺陷、无抗生素抗性基因标记的芽孢；且重组枯草芽孢杆菌芽孢通过下述步骤制备：(1)构建重组载体：构建含枯草芽孢杆菌芽孢衣壳蛋白与CyHV‑2免疫保护性抗原融合表达的重组基因、两侧有枯草芽孢杆菌位点特异的重组酶Xer识别和切割序列的抗生素抗性基因、以及以控制芽孢萌发的关键基因为整合片段的重组载体；所述枯草芽孢杆菌芽孢衣壳蛋白选自CotB、CotC、CotE、CotG、CotX，CyHV‑2保护性抗原选自ORF25B、ORF25，所述控制芽孢萌发关键基因选自gerA、gerB和gerK操纵子，所述枯草芽孢杆菌位点特异的重组酶Xer识别和切割序列是如SEQ ID NO.25所示的nif序列；(2)将重组载体转化枯草芽孢杆菌，通过同源重组将融合表达的重组基因整合于染色体中并使芽孢萌发基因插入失活，并通过切除重组和负筛选获得无抗生素抗性基因的重组菌株；(3)诱导重组菌株细胞产生萌发缺陷、无抗生素抗性基因标记以及表面展示CyHV‑2免疫保护性抗原的重组芽孢。