[发明专利]一种杜梨原生质体的制备方法有效
| 申请号： | 201710360788.0 | 申请日： | 2017-05-19 |
| 公开（公告）号： | CN106967670A | 公开（公告）日： | 2017-07-21 |
| 发明（设计）人： | 唐君;常有宏;蔺经;李晓刚 | 申请（专利权）人： | 江苏省农业科学院 |
| 主分类号： | C12N5/04 | 分类号： | C12N5/04 |
| 代理公司： | 南京苏高专利商标事务所(普通合伙)32204 | 代理人： | 肖明芳 |
| 地址： | 210014 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明属于细胞生物学及生物技术领域，公开了一种杜梨原生质体的制备方法。本发明通过杜梨材料的前处理和质壁分离处理，利用纤维素酶、离析酶和果胶酶组合酶解杜梨叶肉组织，有效实现了杜梨原生质体的制备，克服了杜梨原生质体难以分离的问题，有效建立了杜梨叶肉原生质体的制备方法。本发明为突破杜梨遗传转化瓶颈，建立杜梨细胞工程技术体系，为杜梨原生质体遗传转化、基因瞬时表达检测、原生质体融合等提供了技术依据。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 杜梨 原生 质体 制备 方法 | ||
【主权项】：
一种杜梨原生质体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)材料的选取：选取杜梨的叶片作为处理材料，用水冲洗，消毒，并用无菌水冲洗干净待用；(2)材料的前处理：将步骤(1)得到的材料，在室温黑暗环境下进行前处理，处理后将叶片切成细叶丝；(3)质壁分离处理：将步骤(2)得到的细叶丝浸入质壁分离处理液中，在室温黑暗环境下避光处理；(4)酶解处理：将经步骤(3)质壁分离处理的细叶丝加入酶解液中，静置，避光酶解；当酶解液变绿时置于恒温摇床上震荡，促使原生质体释放出来；(5)原生质体收集：将经步骤(4)酶解的细叶丝溶液，加入等体积的等渗液，用细胞筛过滤，除去未解离组织；将滤液离心，弃上清液收集原生质体沉淀。
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